艾灸预刺激对AD大鼠细胞周期调节因子CyclinA%2cp21%2fcip的影响.pdfVIP

p21/cip的阳性细胞数。结果:通过2个月的预艾灸治疗，预艾 组大鼠海马区CylinA阳性细胞 数较模型组有显著降低(P0．01)，p21/cip阳性细胞数有显著增强(P0．01)。结论: 艾 预 刺激对异常表达的细胞周期相关蛋白有一定的逆转作用，从而减少AD的病理改变或相关的细 胞凋亡，达到防治AD的目的。 【关键词】阿尔茨海默病；艾 ；预刺激；CyclinA； p21/cip 阿尔茨海默病 （Alzheimers disease，AD），又名老年性痴呆，是伴随大脑老化而出现 的进行性记忆力减退、认知功能障碍为主要临床表现的疾患。以老年斑、神经元纤维缠结、 大量的神经元丢失为主要的病理改变。近年来，随着对细胞周期及其调控研究的深人，人们 【1,2】 发现AD 病理改变与细胞周期相关蛋白的异常表达有关 。因此，了解细胞周期的调控对防 治AD 病理改变及其相关的细胞凋亡具有重要的意义。本研究从治未病的角度观察艾 预刺激 对AD 模型大鼠细胞周期调节因子CyclinA、p21/cip 的影响，初步阐明细胞周期相关蛋白在 AD 病理改变中的作用。 1 材料与方法 1．1 实验动物分组 10±2月龄清洁级SD大鼠60只，体重(360±20)g，雌雄各半(由华中科技大学同济医学院 实验动物中心提供)。购进后适应性喂养7天，正常饮食、饮水，即开始进行Morris水迷宫测 试，剔除不合格者(即反应过于迟钝或灵敏者)。将合格大鼠40只称重后随机分为正常组、假 手术组、模型组、预艾 组，每组10只。 1．2 主要实验仪器及试 Morris水迷宫 （成都泰盟提供），颅脑立体定位仪 （国营西北光学仪器厂），牙科钻 （成 都康发医疗器械有限公司），石蜡切片机（广州三元科技有限公司），微量注射器(5μl，上 海医用仪器厂)，A β1－42 （美国 Sigma公司），兔抗大鼠CyclinA多克隆抗体 （美国 Santa 公司）、兔抗大鼠P21/cip多克隆抗体(美国 Thermo公司)。 1．3 动物模型制作 大鼠称重，用lO％水合氯醛 （4ml/kg）麻醉后，按大鼠脑立体定位图谱进行定位，在前 囟后3.3mm，中线左右各旁开1.5mm,用牙科钻钻一小孔(直径lmm)，垂直插入微量注射器，使 针尖自颅骨表面缓慢进针3.3mm至海马区, 用微量注射器分别注入5uL聚集 的A β （A β 1-42 1-42 先在50uL二甲基亚砜溶液中混匀溶解，离心机离心后再放入50ulPBS缓冲液中稀释，离心机离 心后4℃冰箱保存备用），5min内注射完，注射后 针5min，按1.0mm/min速度缓慢出针，以 免拔针时药物溢出，术后牙托粉封固颅骨孔，缝合头皮，局部外敷青霉素G粉，术后3日内每 154 天肌注青霉素80万U以预防感染。 1．4 处理方法 正常组：不进行任何处理，作为实验对照组； 假手术组：颅内注射等量生理盐水，手术方法及注药方法同模型组； 模型组：造模成功后，不进行任何治疗； 预艾 组：正常大鼠造模前先给预艾 刺激。艾 方法：采用美容艾条 （直径约0.6cm）， 取穴同预电针组，于“百会”和双侧 “肾俞”三个穴位上方2-3cm 处用自制固定支架悬 ， 使穴位表皮温度在43±1℃，持续10min，每日1 次，6 日为1 疗程，疗程间休息1 日，共3 个疗程。施 结束当日即开始给大鼠脑内注射A β25-35，造模完毕7 天后继续艾 治疗7 天； 1．5 标本制备及检测方法 大鼠用10%水合氯醛足量麻醉，固定于手术台上，开胸暴露并游离出心脏，切开右心房， 经左心室插入灌流针并固定，先灌注无菌冰冻生理盐水 （4℃）150-200ml直至肝和肺脏变白 及右心房流出澄清液后，再灌注冰冻的4%多聚甲醛 （4℃）400ml,先快后慢，待肝脏变硬后， 断头取脑,4%多聚甲醛液固定。CylinA和P21/cip阳性表达采用SABC免疫组化法检测 （具体按 试剂说明书操作）。 1．6 计学处理 所有数据以平均数±标准差( ‘x±S)表示，组间比较采用t检验，用SPASS12．0软件进行统 计分析。 2 结果 表1 各组大鼠海马区CylinA和P2