艾叶燃烧物的抑菌作用.pdfVIP

[2] 面 ，对其具体起抑菌作用的化学物质研究较少。我们提取艾叶挥发油，并燃烧 艾叶分离出轻组分、重组分、焦油，并从重组分中分离得到5-叔丁基连苯三酚， 从灰烬中获得结晶。选取大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和白色念珠 菌为对象菌，采用滤纸片法测定了艾叶挥发油与艾叶燃烧物上述不同组分的抑菌 作用，并对具有较好抑菌效果的5-叔丁基连苯三酚测定了最低抑菌浓度(MIC)和 最低杀菌浓度(MBC)。 1 实验试剂、仪器及材料 牛肉膏、蛋白胨，葡萄糖，琼脂粉等均为生化试剂，吐温80 为化学 ，马 铃薯为市售，NaCl，5-叔丁基连苯三酚 （美国施瑞科技公司）为分析 ，。艾叶 由湖北省蕲春县医药工作办公室提供，品种鉴定郭双喜。大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 由中南民族大学工商学院实验室提供，白色念珠菌 （Candida albicans）由湖北省人民医院提供。 细菌培养用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基:牛肉膏3g，蛋白胨10g, NaCl 5g，琼 O 脂 15g,蒸馏水 1000mL,调pH 7.2, 121 C 灭菌20min。该培养基用于大肠杆菌、 枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的培养。真菌培养用PDA 培养基：马铃薯（200g）， 葡萄糖 （20g），蒸馏水 （1000mL），琼脂15～20g，pH 自然。制备方法：马铃薯 去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加葡萄糖及琼脂，溶化后补足水 O 至1000mL。121 C 灭菌30min。 2 实验方法 2.1 样品的制备 [3] [4] 用蕲艾油简式提取设备 ，以蕲艾油简式提取法提取挥发油 。将艾叶制绒， 暗火燃烧，用苯-甲醇混合溶液吸收燃烧产生的白烟。蒸馏吸收液，母液为黑褐 [5] 色焦油状物质，即为重组分 。燃烧艾绒，在玻璃漏斗壁上 下大量黑褐色焦油， 用无水甲醇溶解，粗滤后再微孔有机滤膜过滤，进行蒸馏浓缩，得到褐色焦油。 用甲醇 （500mL）提取燃烧产生的艾烬 （10g），提取3 天。提取液粗过滤，微孔 有机滤膜 （孔径2 μm）过滤后，蒸馏浓缩至50mL，放置于通风橱中12 小时。有 大量固体产生，过滤得到固体样品。用少量甲醇将固体淋洗3 遍后干燥，将干燥 的固体用少量的蒸馏水溶解，进行结晶，得到的晶体为白色立方晶系粗晶。经过 305 三次重结晶后，得到比较 净的晶体。用75ml 蒸馏水作为吸收剂，吸收艾烟10h， 将吸收液粗过滤，再用孔径2 μm 微孔有机滤膜精滤，得到艾烟水提取物。 2.2 样品溶液的配制 量取蒸馏水 0 mL、10 mL、20 mL、30mL 于 4 个小烧杯中，分别加入 2 mL 的吐温80 后，用磁力搅拌器搅拌至溶液透明。分别称取0.0400g 艾油、重组分 和焦油，每个样品各四份。分别用上述吐温80 溶剂2mL 溶解。观察是否可以完 全混溶。实验结果表明吐温 80 与水的配比为 2：20，三种样品均能很好的溶于 溶剂，并且溶解后可以通过0.22 μm 孔径的无菌滤膜过滤，故采用该浓度作为样 品配置浓度。分别称取0.0400g 晶体和 5-叔丁基连苯三酚，分别用2mL 蒸馏水 溶解，配制成浓度为0.0200g/mL 的溶液。取上述已配好的溶剂和样品溶液，在 无菌操作台，经0.22 μm 孔径无菌过滤器过滤除菌。 2.3 菌种准备 将供试菌种接入斜面培养基，细菌置于37℃恒温培养箱内培养24h，真菌置 于 28℃恒温培养箱内培养 48h，连续转接三次培养后，置于 0～4℃冰箱冷藏。 在无菌操作室中用接种环挑取1环菌体放入装有25mL液体培养基的小锥形瓶里， 充分振摇，细菌置于 37℃恒温振荡培养箱内培养 24h，真菌置于 28℃恒温培养 箱内培养48h，现制备现用。 细菌培养采用牛肉膏蛋白胨培养基，真菌培养采用PDA 培养基。将已配制好 的培养基熔融，冷却至50℃～60℃，在无菌操作台上，用无菌移液管取15mL 加 入培养皿中，冷却为固体培养基。将各菌悬液分别吸取0.05mL、0.1mL、0.2mL、 0.25mL、0