艾灸预处理对应激性胃黏膜损伤大鼠血清IL-1β%2cTNF-α和IL-10的影响.pdfVIP

[1-2] 针灸对胃黏膜的保护作用已被大量的临床和实验研究所证实 ，其作用机 理涉及多种复杂因素：胃的运动、分泌、血流、胃肠激素、氧自由基等各个方 面。尤其艾灸作为一种生理性温热刺激原，在艾 “治未病”和预防溃疡复发 方面独具优势，能够激发机体产生内源性保护物质，作为免疫源激活免疫系统 [3-8] 而治疗消化系统疾病。我们前期的研究表明 ，艾灸对胃黏膜的保护机制可能 是其激发机体产生内源性保护物质的同时，又启动了一系列抗炎、抗氧化、抑 制凋亡等抗损伤和胃黏膜细胞增殖及胃黏膜重建等保护效应。肿瘤坏死因子和 白介素因其广泛的生物学功能而在胃肠道黏膜炎症损伤中起着关键性作用，贯 [9-11] 穿于整个受损过程，也是 致溃疡难以愈合和容易复发的主要原因 。本实验 在以往研究基础上继续探讨艾 足三里、中脘等穴预处理对应激性胃黏膜损伤 的抗炎症损伤机制，及其与 IL-1β、TNF- α、IL-10 的关系，为针灸临床治疗 消化性系统疾病提供实验 据。 1 材料与方法 1.1 实验动物 健康SPF级SD大鼠48 只，雌雄各半，体质量200～250 g，月龄3～4 个月，购 自湖南斯莱克景达实验动物有限公司。将大鼠随机分为空白组、模型组、艾 穴 位组、艾 非穴组，每组12 只。饲养于湖南中医药大学实验动物中心SPF级实验 动物房，饲养温度22～25 ℃，湿度40%～60%，自然采光。 1.2 主要试 及仪器 20％乌拉坦、0.9％NaCl （湖南中医药大学针 生物信息分析重点实验室配 制）；IL-1β,TNF- α,IL-10 放免试剂盒 （北京华英生物技术研究所）；TGL16M 台式高速冷冻离心机（长沙科威实业有限公司）； AEU-210 电子分析天平 （长 沙湘仪天平仪器厂），MILLIPORE 超 水系统(法国)；Elix/RiO3 水系统 （法 国）；DK-8D 型电热恒温水槽 （上海精宏实验设备有限公司）；DHG-9246A 型电热 恒温鼓风干燥箱 （上海精宏实验设备有限公司）。 1.3 处理方法 空白组(A组)：仅做与艾 组相同的固定。 模型组(B组)：不做任何治疗，只做与艾 组相同的固定。 122 艾 穴位组(C组)：两组穴位，①足三里、中脘穴；②脾俞、胃俞穴。每次取 一组穴，两组交替进行。穴位定位参考林文注主编 《实验针 学》常用动物穴位 定位法及 人比照法。足三里位于膝关节后外侧，在腓骨小头下约5 mm处；中脘 位于脐上约20 mm （以胸锁联合和耻骨联合连线下1/4 与上3/4 交点为肚脐）；脾 俞位于第十二胸椎下两旁肋间；胃俞位于第十三胸椎下两旁肋间。将艾条固定在 自制小型 架上，对准施 部位，距离约2 cm处点燃施 。每天每穴连续 30 min ，连续8 d。 艾 非穴组(D组)：两组非穴对照点，①足三里对照点、中脘对照点；②脾俞 对照点、胃俞对照点。足三里对照点位于膝关节后内侧，在胫骨内侧髁约 5mm处 ；中脘对照点位于中脘旁开 1cm；脾俞、胃俞对照点分别位于与脾俞、胃俞平行 后正中线旁开1cm。将艾条固定在自制小型 架上，对准施 部位，距离约2 cm 处点燃施 。每天每穴连续 30 min，连续8 d。 1.4 造模方法 [12] 采用WRS法制作急性应激性胃黏膜损伤模型 。B、C、D组大鼠于第八天处理 后禁食不禁水24 h后，束缚于鼠板上，置于20℃水中，水面平胸骨剑突水平， 10 h后取出松绑。 1.5 指标检测 所有动物于造模后，用20％乌拉坦以10 mL/kg腹腔注射 （Intraperitoneal ，ip）麻醉。剖腹后，将胃的幽门部和贲门部用止血钳结扎，快速用一次性负压 采血针从腹主动脉采血5ml置于37℃恒温水浴箱30min，-4℃低温离心，3000rpm ，离心 15min，离心后提取上清液置于-20℃冰箱保存，放射免疫法测定血清 IL-1β,TNF- α