鸡胸腺肽β4、β15基因的原核表达及其生物学活性测定.pdfVIP

河南农业科 学，2014，43(12)：140—143 JournalofHenanAgriculturalSciences 鸡胸腺肽 p4、1115基 因的原核表达及其 生物学活性测定 张 澍，王燕华，郭保党，冀 君 ，吕慧芳，胡小敏，姚伦广 (南阳师范学院 中英南阳洛桑昆虫生物学联合实验室／河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室，河南 南阳473061) 摘要：为获得具有生物学活性的鸡胸腺肽 3[4、3[15，根据大肠杆菌密码子偏爱性 ，设计合成鸡胸腺肽 T#I、 5基 因片段 ，采用重叠 PCR获得完整的 、 5基 因，将其连接到 pET一28a(+)栽体 上 ，转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达，经SDS—PAGE鉴定，应用镍柱亲和层析纯化蛋 白 质，采用E玫瑰花环试验测定其生物学活性。结果显示，成功构建大肠杆菌表达载体 pET28a—T3[4 和 pET28a—T815，目的蛋 白在大肠杆菌中大量可溶性表达，蛋白质分子量大小均为 6kD，镍柱亲 和层析获得 了纯化的蛋 白质。E玫瑰花环试验结果显示，重组 T114的活力为 35．5 ，TB15的活力 为 18．79／6，均能够明显增强T淋 巴细胞的活性 。表明 和 邓 l5基 因得到成功表达和纯化，并 具有 良好的生物学活性 。 关键词：胸腺肽 B4基 因；胸腺肽 B15基因；表达 ；纯化；E玫瑰花环试验 中图分类号 ：$852．4 文献标志码 ：A 文章编号 ：1004—3268(2014)12—0140—04 StudiesontheExpressionsofChickenThymosinl34and I315inE．coliandTheirBiologicalActivities ZHANGShu，WANGYan-hua，GU0Bao—dang，JIJun，LU Hui—fang， HU Xiao—rain。YAO Lun—guang (RothamstedResearchJointLaboratoryofInsectBiology，NanyangNormalUniversity／HenanProvincial KeyLaboratoryofFuniuMountainInsectBiology，Nanyang473061，China) Abstract：Thisstudyaimedtogetchicken thymosin114and1115．AccordingtoE．colicodon preference，chickenthymosin114and1315cDNAsequencesweredesignedandsynthesized．Twofull lengthgeneswereamplifiedbyoverlapPCR technique．Then the 、 5 geneswerecloned intovectorpET一28a(+ )respectively．Therecombinantplasmidsweretransferred intoE．coli BL21(DE3)forexpression．ThetwoproteinswerepurifiedbyNi抖 affinitychromatographyafter analysisby SDS_，and then theiractivitieswere detected by E rosette test．Theresults showed that two expression plasmids pET28a—T114 and pET28a—Te15 were constructed successfullyandproteinswereexpressedefficientlyinsolubleform．Themolecularoftwoproteins wereall6kD．ThetWOpurifiedproteinswereobtainedbyNi affinitychromatogra