siRNA干扰MEKK3基因促进TRAIL诱导乳腺癌细胞凋亡.pdf

siRNA 干扰MEKK3 基因促进TRAIL 诱导乳腺癌细胞MCF-7 凋亡 摘 要 目的：TRAIL(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand)具有诱导乳腺癌细胞发生凋亡的作用，但在部分细胞株中产生抗 性。促分裂原活化蛋白激酶 / 细胞外信号调节激酶- 激酶 3(Mitogen-activated protein/extracellular signal regulated kinase-kinase 3 ,MEKK3)是 MAPK 家族的上游调节成分，具有细胞保护和抑制 本研究设计应用siRNA抑制乳腺癌MCF-7 细胞MEKK3 的表达, 凋亡的作用。 并结合应用TRAIL，以期能促进TRAIL 诱导乳腺癌MCF-7 细胞发生凋亡。 方法：应用化学合成的 MEKK3-siRNA，以脂质体介导 MEKK3-siRNA 转染人乳腺癌细胞MCF-7，以RT-PCR 和Western blotting 法检测MCF-7 细胞的 MEKK3 mRNA 和蛋白的表达。应用 MTT 法和流式细胞术检测 MEKK3-siRNA 与 TRAIL 联合处理后 MCF-7 细胞的增殖和凋亡。通过凝胶 电泳迁移率变动分析技术检测TRAIL与MEKK3-siRNA联合作用后对MCF-7 细胞NF-kappa B 信号通路激活程度的影响。 结果：MEKK3-siRNA 转染后能有效而暂时性抑制MCF-7 细胞中MEKK3 mRNA 水平和蛋白水平的表达( P 0.01)，TRAIL 具有抑制MCF-7 细胞增 殖作用，但其抑制作用较弱。MEKK3-siRNA 可以增强 TRAIL 对 MCF-7 细 胞的生长抑制作用和诱导凋亡作用，两者联合应用存在显著的协同效应； MEKK3-siRNA 单独应用可以抑制 MCF-7 细胞 NF-kappa B 信号通路的激 活，MEKK3-siRNA 与TRAIL 联合作用也可明显抑制MCF-7 细胞NF-kappa B 信号通路的激活。 结论：siRNA 干扰 MEKK3 基因表达，能促进 TRAIL 对乳腺癌 MCF-7 细胞凋亡的诱导作用，其机制可能是通过抑制MEKK3 mRNA 及蛋白表达， 进而抑制NF-kappa B 信号通路的激活而起作用。 [关键词] 乳腺癌,TRAIL,siRNA,促分裂原活化蛋白/细胞外信号调节激 酶-激酶3（MEKK3）,凋亡,NF-kappa B MEKK3-TARGETED SIRNA COMBINED WITH TRAIL INDUCES APOPTOSIS OF BREAST CANCER CELL LINE MCF-7 Objective: TRAIL (tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand) has the apoptosis inducing effect on breast cancer cells, but there has resistance in some cancer cell lines. Mitogen-activated protein/extracellular signal regulated kinase-kinase 3 (MEKK3) is a upstream regulator of MAPK.It has the cell protecting and apoptosis inhibiting effect.The study was designed to inhibit the expression of MEKK3 gene. Combined with TRAIL, it is expected to enhance the apoptosis inducing effect of TRAIL on the breast cancer cell line MCF-7. Methods: Chemically synthesized small interfering RNA (siRNA) targeting MEKK3 was transfected into human breast