实验七DNA的分离和鉴定（五年制）.ppt

DNA的分离和鉴定 实验原理 1 0.14mol/L NaCl：脱氧核糖核蛋白与核糖核蛋白在0.14mol/L NaCl中的溶解度差别很大，脱氧核糖核蛋白在此溶液中的溶解度很低 2SDS：能使得脱氧核糖核蛋白产生解聚作用，使得DNA和蛋白质分开 3 氯仿：有机溶剂使得蛋白质发生变性，而使得DNA溶解于水相 4 异戊醇：减少操作过程中泡沫的产生，并有助于分相 5 冷乙醇：乙醇能与水以任意比例互溶，从而使得DNA沉淀析出 判断你所提取的DNA的纯度并计算其浓度 判断纯度 OD260/OD280=1.6-1.8 DNA较纯 OD260/OD2801.6 蛋白质污染 OD260/OD2801.8 RNA污染 计算浓度 1 所提取的DNA浓度是多少？ A=KLC C=A/KL（ds核酸K=0.02，ss核酸K=0.025,L为1cm） =OD260/0.02×稀释倍数 2 所提取的DNA的质量 肝匀浆（2ml/1g肝组织），每克肝组织含有多少DNA？ OD260/0.02×稀释倍数（ug/ml）×2 * * 2ml 肝匀浆加2ml 0.14mol/L NaCl 5 8000rpm 沉淀 (脱氧核糖核蛋白) 1 +0.14mol/L NaCl 1.0ml将沉淀重悬 2 滴加5% SDS 1.0ml，放入60℃水浴（边加边搅拌）10 后取出冷却置室温 3 加入氯仿-异戊醇液4ml（剧烈震荡） 8000rpm 10 溶液分三层(上层：水相DNA，中层：蛋白质，下层：有机溶剂) 上清液加95%冷乙醇4.0ml, （颠倒混匀） 5000rpm 10 上清液弃去 沉淀为纯化DNA +0.01M NaOH 2ml 溶解（用枪吹打）（DNA母液） 取0.1ml母液+2.9ml 0.01M NaOH稀释,用紫外分光光度计测DNA(若OD0.7，再稀释测定) 取上层液体（宁缺毋滥） OD260 OD280 R 原始记录以及实验报告要求