实验三酶Km测定徐燕.ppt

酶促反应动力学 实验三 酶动力学 速率 影响因素 酶浓度 底物浓度 温度 PH 激活剂 抑制剂 ※反应速度与底物浓度关系： 米－曼氏方程式，米氏方程式 [S]： V： Vmax： Ｋm： Ｖ Vmax[S] Km + [S] ＝ ── 底物浓度 不同[S]时的反应初速度 最大反应速度(maximum velocity) 米氏常数(Michaelis constant) “酶促反应速度”指反应的初速度 酶促反应速度 初速度（v0）：在反应刚开始的一段时间内的反应速度。 底物浓度对酶促反应速度的影响 ——Km值测定 当反应速度为最大反应速度一半时 Km＝[S] ∴Km值等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，单位是mol/L。 2 ＝ Km + [S] Vmax Vmax[S] Vmax V [S] Vmax/2 Km 双倒数作图法(double reciprocal plot)，又称为 林-贝氏(Lineweaver- Burk)作图法 Vmax[S] Km+[S] V = （林－贝氏方程） + 1/V= Km Vmax 1/Vmax 1/[S] 碱性磷酸酶Km值测定 * 碱性磷酸酶AKP活性测定 * * 1.底物和酶取样准确 2.保温时间准确 1 2 3 4 5 6 7 加入酶的时间 加入碱性溶液 终止反应的 时间 9:00:00 9:00:30 9:01:30 9:02:00 9:02:30 9:03:00 9:01:00 9:15:00 9:15:30 9:16:00 9:16:30 9:17:00 9:17:30 9:18:00 保证每个试管的反应时间为15分钟 * 1 2 3 4 5 6 7 8 A1 0.000 * 1.绘制矩形双曲线图 2.绘制双倒数图，并通过双倒数图读出碱性磷酸酶AKP对磷酸苯二钠的Km值 * 1.数据记录表格 2.实验结果：计算Km值 1 2 3 4 5 6 7 A [S] 1/A 1/[S] * *