实验酵母菌的计数方法和应用.pdf

。 微 方敢 、 ≮ 一∥ 酵母茵 羲 应 口 邵江樵 一 、 计 数 原理 定，观察在一定的容积中酵母菌的个体数 目，然后推 酵母菌是一种在适宜条件下进行出芽生殖 的 算 出含菌数。 单细胞真核生物 ，个体较大，能在高倍显微镜下清 血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微 晰可见。酵母菌的生长周期短，增殖速度快，在实验 生物的一种仪器。在血球计数板的方格网上刻有 9 室条件下 ，用液体培养基培养酵母菌，可以观察酵 个大方格，只有中间的一个大方格为计数室，供微生 母菌种群数量随时问变化 的情况。对培养液中的酵 物计数用。计数室刻度有 2种 ：一种是 25中格x16 母菌逐个计数是非常网难 的，可以采用抽样检测法 小格 ，而另一种为 16中格x25小格 (如下图)，它们 进行估算 。利用血球计数板在显微镜下直接进行测 都是 由400个小格组成 。 中间的小方格网是计数室 25中格x16小格计数板 l6中格x25小格计数板 每个计数室边长为 1mm，则每个计数室面积为 即载玻片与盖玻片之间高度=所加菌液的厚度。 1mmz。盖上盖玻片后，载玻片 与盖玻片之间高度为 14／00mmL__每个小格 的面积 。KB—K一25中的 0．1mm。所以每个计数室的体积为 0．1mm 。 “25”——计数室有 25个中格。 计数时，如果使用 16中格x25小格规格的计数 2．从试管中吸取出培养液进行计数之前，建议 室，要按对角线位 ，取左 f：、右上、左下、右下 4个 中 将试管轻轻震荡几次。这是为什么? 格(即 100小格)的酵母菌数。如果规格为 25中格X 轻轻震荡几次是为了使试管中酵母菌分布均 16小格的计数板，除了取其 4个对角方位外，还需 匀，减少实验误差 ，使实验更加准确。 再数中央的一个中格f即80小方格)的酵母菌数。注 3．制片时为什么不直接向计数室滴加酵母液? 意：计数时中格的边界足双线，要 以内线为边界。每 因为滴管的 1滴体积远大于计数室的0．1mm ，直 毫升培养液中酵母菌总数=每小格平均菌数x4OOx 接滴加会使盖玻片浮起，所 以需要摇匀稀释的酵母 l04X菌液稀释的倍数。 菌液，用无菌滴管吸取少量菌液 ，从盖片边缘滴一 二、取样 、制片和观察 中的几个要求 小滴 ，使菌液 自行渗入计数室 。注意：计数室内不能 1．看懂血球计数板上板面数值的含义 有气泡，若有气泡则重新制片。 I I 4．发现视野内酵母菌数 目太多，挤成一堆，无 O．1mm XB—K 25 法进行计数，应进行怎样的处理后 ，才能进行精确 地计数? 4I1】(】【mm，‘ l同J 用 1／10稀释法处理。另取一试管，加入9mL的无 菌水；充分振荡培养液后，量取 1mL培养液；加入 9 mL无菌水的试管中，完全混合后 ，使其稀释 10倍。 A．血球计数板的正面