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人类外周血基因组DNA的提取 实验目的 掌握人外周血基因组DNA的提取方法 实验用品 试剂:STE溶液,10%SDS,饱和酚, 氯仿醇,蛋白酶K,异丙醇, NaAc 器材:离心管,EP管,加样枪,枪尖,离心机,水浴箱 实验过程 1、取血液加4-5倍蒸馏水,混匀,静置10min 2、离心3500rpm,10min,弃上清 3、再加4-5倍水,混匀,静置10min 4、离心3500rpm,10min,弃上清 5、加1ml蒸馏水于沉淀物中,混匀后转入EP管内 6、离心8000rpm,2min,弃上清,弃彻底 7、分别加入500ulSTE,50ulSDS,10ul蛋白酶K 8、混匀,55度水浴振荡消化3-5h 9、加入等体积(600ul)饱和酚,振荡混匀,离心12000rpm,5min 10﹑吸取上清转移至另一个EP管内,注意不要吸到酚 11、在上清内分别加入300ul饱和酚和300ul氯仿醇溶液,振荡混匀后,离心12000rpm,5min 12、吸取上清转移至另一个EP管内,在上清中加入600ul氯仿醇,离心12000rpm,5min 13、吸取上清转移至另一个EP管内,加入50ul的NaAc,再加入等体积的异丙醇,-20度3小时 14、离心12000rpm,12min,弃上清 １５、用７５％乙醇均匀洗管壁两次，弃乙醇，晾干３０min １６、加入５０ul蒸馏水，弹匀，－２０度保存 实验报告 实验过程和结果的描述，分析实验成功或不足的原因 * *
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