粪便标本肠出血性大肠杆菌O157H7的分离方法(4页).docVIP

粪便标本肠出血性大肠杆菌O157:H7的分离方法 包括标本采集和增菌、免疫磁珠富集和培养、生化反应、血清学和毒力因子鉴定等步骤。 1．粪便标本增菌 采集的标本应插入卡里－布莱尔半固体保存培养基中，立即送实验室接种于增菌培养基（EC肉汤+10mg/L新生霉素或Tryptic Soy Broth）； 增菌培养：增菌液可用添加10mg/L新生霉素的EC肉汤。也可用1/8N 的HCl+0.5%NaCl溶液，将标本处理30秒后，再用胰大豆胨培养液增菌。 2．免疫磁珠富集方法 取下磁板，然后将事先编号的1.5ml离心管置于Dynal MPC－M架上； 重新悬浮E.coli O157的DynaL磁珠,直到底部的沉淀消失。吸取抗E.coli O157磁珠， 每管20ul； 取1ml增菌培养物的标本, 加入管中，然后盖紧管，每加一个样品,都要换新管； 颠倒Dyna架几次, 然后在室温条件下, 置于 Dynal MX3样品混合器上,不断轻轻搅动,以阻止磁珠沉淀,持续时间10分钟（如果没有混合器， 可人工混合）CT－山梨醇麦康凯（C－头孢菌素类抗生素、T－亚碲酸钾）等选择性培养基上，370C培养16～24小时。 3．生化反应、血清学和毒力因子鉴定 生化反应鉴定：将疑似肠出血性大肠杆菌O157：H7的菌落进生化反应。若生化反应特点符合大肠杆菌的鉴定标准，进行血清学鉴定。 血清学鉴定：使用O157和H7特异