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蛋清溶菌酶分离纯化研究进展 口 左 胜 吴佳欢 廖志勇 (温州大学生命与环境科学学院 浙江 ·温州 325035) 摘 要：溶菌酶 (Lysozyme)是一类特异性作用于微生物细胞壁的水解酶，广泛应用干食品添加剂、临床医疗、免 疫等方面。从蛋清溶菌酶分离纯化研究方面进行阐述，介绍蛋清溶菌酶提取工艺，以及蛋清溶菌酶活性与纯度 测定的方法，并对未来蛋清溶菌酶的分离纯化工艺的发展进行展望。 关键词：溶菌酶 蛋清 分离 纯化 酶活性 中图分类号：TQ464 文献标识码：A 文章编号：1007．3973(2013)003．073．02 溶菌酶是一种安全无毒的蛋白质，能选择性地分解微生 然而，与国外相比，我国的溶菌酶制造业规模仍然有较大差距， 物细胞壁，而不影响其它组织，因而具有 良好的溶菌作用，它 生产技术仍相对落后。因而 目前国内高活性蛋清溶菌酶的生 是一种安全可靠且性能良好的杀菌剂，已广泛应用于食品防 产供应还不能满足我国日益增长的需求。 腐、医药制剂、化工等行业。自然界中，鸟类和家禽蛋清中溶 2蛋清溶菌酶的提取方法 菌酶含量较多，约为0．2％0．4％。溶菌酶的产量直接影响着溶 目前蛋清溶菌酶的提取方法主要有直接提取法、超滤法、 菌酶的应用。选择合适的，经济的分离纯化方法仍是当前研 亲和膜层析法、离子交换法、反胶束萃取法、结品法和沉淀法 究重点。目前溶菌酶分离纯化的方法主要包括结品法、膜色 等方法。 谱、沉淀法、离子交换法、反胶团萃取、电泳法、双水相萃取、亲 直接提取法是依据溶菌酶的理化性质，利用溶菌酶和杂 和沉淀等。新的大规模生产工艺也将随市场需求而不断涌现。 蛋白等电点的差异，通过调节pH值来沉淀蛋白，达到分离溶 1溶菌酶研发历程 菌酶的目的。该方法操作简单，但产品纯度低。超滤法则是 溶菌酶是一类特异性作用于微生物细胞壁的水解酶，常 根据膜孔径的大小，在压力的驱动下将分子大小不一的溶质 见的有几丁质酶、内-N．乙酰己糖胺酶、酰胺酶、磷酸甘露糖酶、 分离，从而获得 目标物。超滤法是一种相对新兴的分离技术， 脱乙酰壳多糖酶等。从蛋清中提取得到的溶菌酶由129个氨 产量和纯度都较高。层析法因分离速度伙、处理量大等优势 基酸残基组成，是一种碱性蛋白质，有四对二硫键，富含碱性 而受到研发人员的广泛关注，包括膜亲和层析法、离子交换层 氨基酸。 析法等。尤其是离子交换层析法2O世纪8O年代便开始广泛 人们对溶菌酶的研究从上世纪初开始，而有关溶菌酶的 应用于溶菌酶地分离纯化。此方法操作简便、成本低、高效、 研究报道最早足 1907年NicoHe等学者发表的关于桔草芽胞 可实现 自动化操作，是溶菌酶生产中的常用方法之一。 杆菌溶解因子的存在。Flemmning等于 1922年发现具有强力 2．1结 晶法 溶菌活性的成分存在于人的鼻涕、唾液等中，并把具有溶菌活 溶菌酶具有耐热、耐酸的特性，并且易溶解在盐溶液，稳 性的这些因子统称为溶菌酶。Salton等人的研究证明，溶菌酶 定性好，通过改变盐溶液的条件，可使溶菌酶以品体形式析j“ 能够切断N．乙酰胞壁酸和N一乙酰氨基葡萄糖之间糖苷键，从 而得以分离，结品法也因此成为制备溶菌酶晶体最为传统的 而破坏细胞壁支架，使细胞在渗透压的作用下裂解。Phillips 方法之一。该方法的主要过程可简述如下，向富含溶菌酶的 等人用 x射线衍射法阐明了溶菌酶的三维结构。1967年，英 蛋清中加入(NH)：SO等中性盐，依据溶菌酶的等电点区，用氢 国菲利普集团首先报道了溶菌酶作用底物复合体的X射线衍 氧化钠调节蛋清溶液的pH，再力JI入溶菌酶晶体进行诱导，4~C 射，闸州了其结构。这些研究无论对蛋清溶菌酶的研究，还是 放置大概2周，巳IJ可析出大部分的溶菌酶品体，而与其它杂蛋 在近代酶化学研究史上都有着举足轻重的地位。 白质得 以分离。如要得到到更高纯度的溶菌酶，可将析出的 随着生活水平的提高和科学技术的进步，在药物和食品 溶菌酶晶体过滤，重新溶解，再利用上述同样的方法进行重结 中添加化学药品开始被许多国家限制，因此具有天然活性的 晶即