人源中和性抗高致病性禽流感病毒H5N1基因工程全抗体的研制.pdf

第24卷第3期 病 毒 学 报 V01．24No．3 1 1 1 1篁!星 星坚!型呈量曼』竺望圣些垒兰望三兰!塞窒兰呈坌兰 坚!￥ !!!! 人源中和性抗高致病性禽流感病毒H5N1基因工程全抗体的研制 孙丽娜1，刘琴芝1，王敏1，李川1，李梓1，胡晓芬1，朱莉莉1，李群2，王世文1，舒跃龙1，梁米芳1，李德新1 (1．中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室，北京100052； 2．安徽省疾病预防控制中心，合肥230061) 摘要：运用噬菌体表面呈现技术，从禽流感病人恢复期血中获得淋巴细胞，通过基因工程手段，构建了人源抗 蛋白HA(A／Viet 素蛋白HA的人源单抗Fab段基因，并在大肠杆菌中获得有效表达。通过序列测定确定抗体轻重链型别，然后将 阳性克隆的轻链和重链Fd段基因分别克隆入全抗体表达载体pAC-L-Fc后转染昆虫Sf9细胞，利用杆状病毒／昆 虫细胞系统实现全抗体的分泌型表达。用ELISA、IFA和流式细胞术对所获人源单抗的功能特性进行鉴定。结 果表明，我们获得了2株特异性针对H5N1禽流感病毒血凝素蛋白HA而与甲1型和甲3型人流感病毒无交叉反 IgG01能够广泛地中和HA基因进化上属于Clade2的中国南方、北方及中部地区的H5NI禽流感病毒分离株，同 时还对属于CladeI的越南H5N1分离株A／Viet Viet Nam／1203／2004，但是对属于Clade2的所有中国H5N1分离株均具有中和作用。人源中和性抗禽流感病 毒H5N1基因工程全抗体的获得不仅为高致病性禽流感病毒H5N1的预防和治疗带来了希望，同时也为其疫苗 研制提供了新的思路。 关键词：禽流感病毒；噬菌体表面呈现；基因工程抗体；Fab抗体 中图分类号：R373．1 文献标识码：A 文章编号：1000—8721(2008)03-0165-07 avianin- 关注[1]。流感病毒是一种球形或杆状、有包膜的单 高致病性禽流感(Highlypathogenic fluenza，HPAI)是由正黏病毒科流感病毒属A型 股负链RNA病毒，基因组分为8个节段。病毒囊 流感病毒引起的禽类烈性传染病。高致病性禽流感 膜表面的跨膜糖蛋白血凝素蛋白(HA)和神经氨酸 病毒H5N1自1997年发生18人感染6人死亡的 酶蛋白(NA)是流感病毒的主要免疫原性抗原。 疫情以来，一直受到国际社会的高度关注，特别是自 HA识别靶细胞表面受体并与受体相结合，具有与 2003年以来高致病禽流感病毒H5NI动物疫情在 宿主细胞膜融合活性，能够诱导机体产生保护性中 亚洲已呈地方性流行，并且已经蔓延到欧洲和非洲。 和抗体口’3]。由于HA基因突变而引起的HA抗原 发生人感染病例的国家和地区不断扩大，2003年底变异往往会导致免疫失败和变异毒株流行，流感病 以来，截止2008年2月20日，全球新发人禽流感 毒频繁并且持续地发生抗原性变异，目前缺乏有效 (H5N1)病例数已达362例，其中死亡228例。中 的人用禽流感疫苗，也没有有效的治疗药物[4’5]。 国自2003年11月第一例禽流感病毒H5N1感染病 有研究表明，人源及人源化中和性抗禽流感病毒 例确诊以来，一共有28例，其中18例死亡。高致病 H5NI单克隆抗体对小鼠有良好保护和治疗效 性禽流感病毒H5N1不仅对禽类带来巨大威胁，还 果[6J]。因此，研制特异性针对H5NI禽流感病毒