鹅免疫球蛋白λ型轻链基因克隆及其恒定区特异性抗体的制备与应用研究.pdfVIP

摘 要 摘要 免疫球蛋白(Ig)是体液免疫的重要效应分子，在机体免疫和调节中具有重要的作用， 有关鹅Ig分子水平方面的研究国9,J外还未见报道。 序列，然后对克隆得到的序列进行了序列比对分析、氨基酸相似性分析、信号肽预测、糖基 化分析、3D结构分析和C区进化分析，得出克隆得到的cDNA序列为GolgL，且属于九型。 其次根据克隆得到的GolgL序列设计特异性表达引物，采用大肠杆菌表达系统得 分析了抗GolgCL多抗与禽类IgL之间的抗原抗体反应，进一步证实了禽类IgCL上存在有共 同的B细胞抗原表位。 最后本研究以Protein A亲和层析纯化的鹅血清Ig免疫BALB／c小鼠，获得2株分泌抗 1和3G9，然后对这两株杂交瘤细胞株 GoIgCL单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为1Bl blot和问接ELISA试验结果均表明这两株杂交 进行了生物学鉴定。间接免疫荧光、Western 瘤细胞分泌抗GolgCL抗体，不与其它物种Ig发生反应，特异性良好。以制备的抗GoIgCL 单抗为配体制各的单抗亲和层析柱能纯化出鹅血清中的Ig；用HRP标记后的抗GoIgCL单抗 可以检测免疫BSA和GPV病毒样粒子后鹅机体内特异性抗体的消长规律：另外，用抗GolgCL 单抗建立的定量测定鹅Ig含量的ELISA方法，可以检测鹅血清中Ig的含量。 综上所述，本研究首次克隆得到了GoIgL基因，并对其进行一系列的分析鉴定；根据克 隆得到的GoIgL基因序歹0，原核表达了恒定区的重组蛋白，以此制备了GolgCL的特异性抗 体，然后对制得的抗体进行了应用研究，为鹅基础免疫学的研究奠定了基础。 关键词鹅；免疫球蛋白；轻链：恒定区：多克隆抗体；单克隆抗体：免疫检测：免疫纯化 Abstract OF SE CLONEG00IMMUNOGLOBULINLIGHT CHAINWITH九TYPEANDAPPLICATIONOF SPECIFICANTIBODYPI乇EPlAREDAGAINSTITS CONSTANTI迮G10N Abstract an effectormoleculeofhumoral an Immunoglobulin(Ig)isimportant immunity,whichplays roleinimmune hasno ofthe SOfarat important regulation．Therereport goose immunoglobulin level． molecule forPCR were tothecDNA of First，theprimers amplicationdesignedaccording sequences chicken duck GenBank，the Iglightchain(ChlgL)andIglightchain(DulgL)ingooseIglight wasfirstclonedRT-PCRandNestedPCRcombinatedinthe chain(GolgL)cDNAsequences by of here the world．Thenthecharacter