甘蔗蔗糖转运蛋白ShSUT4基因克隆及其表达分析.pdfVIP

甘蔗蔗糖转运蛋白ShSUT4基因克隆 及表达分析 1,2＊ 2＊ 2 2 2 2 2 赵婷婷 王俊刚 冯翠莲 蔡文伟 王文 熊国如 伍苏然 杨本鹏 张树珍2 2＊＊ （1 海南大学 海口 570228；2 中国热带农业科学院热带生物技术研究所、甘蔗研究中心， 农业部热带作物生物技术重点开放实验室 海口 571101） 摘要：甘蔗是一种重要的糖料和能源作物。蔗糖是甘蔗体内光合产物运输和积累的主要形式，而蔗糖转运 蛋白介导蔗糖的运输、积累过程中的跨膜转运。本文采用 RACE 技术从甘蔗体内克隆出一新型蔗糖转运蛋 ShSUT4 GenBank GQ485583.1 501 GPH /H+ 白基因命名为 （ 登录号为 ），预测其编码 个氨基酸，存在 （蔗糖 共转运体）超家族保守结构域，具有 12 跨膜结构。初步研究结果表明 ShSUT4在甘蔗根茎叶中均有表达； 且在 9 个不同甘蔗品种成熟茎中表达量存在差异，在其中 8 个品种中 ShSUT4表达量的高低与所测茎节中 锤度高低呈正相关性，推测ShSUT4可能参与调控甘蔗体内蔗糖的积累。 关键词：甘蔗，蔗糖转运蛋白，ShSUT4，表达分析 高等植物体内光合碳同化物的运输、分配、积累是其重要的生命活动之一。蔗糖是植 物体将光合产物从源器官向库器官长距离运输的主要形式。蔗糖的跨膜运输需要蔗糖转运蛋 [1] + 白 （sucrose transporte ，SUT；sucrose ca ier, SUC ）的介导 。蔗糖转运蛋白是一种蔗糖/H + 共转运体，具备典型的 12 跨膜结构，能够利用细胞内外 H 浓度梯度，进行蔗糖的跨膜转运 [2] [3] 。自从 1992 年，Riesmeie 等从菠菜中克隆首个植物蔗糖转运蛋白基因以来 ，目前已在 多种植物中成功克隆到蔗糖转运蛋白基因。SUT 包括三种不同亚族成员：SUT1、SUT2、 SUT3，在植物体内碳同化物的韧皮部装载、库端卸载及植物生长发育调控过程中发挥不同 作用[4,5] 。SUT4 亚族成员主要是定位在液泡膜上的一种 H+/蔗糖同向转运蛋白，在单子叶和 双子叶植物中均有报道，其功能不仅将植物源端暂时储存于液泡中的蔗糖在夜间输出液泡， 进行韧皮部装载，维持黑暗条件下库器官的蔗糖供给；还将库端液泡内的蔗糖输出，维持库 端渗透压，有利于蔗糖的进一步积累[6-10] 。 甘蔗是一种高光效的 C4 植物，是世界重要糖料作物之一。蔗糖是甘蔗体内光合同化物 的主要运输及贮存形式。在甘蔗成熟茎秆中蔗糖累积量超过干重的 50% 。糖料甘蔗主要用 于生产蔗糖，对其体内蔗糖的运输及积累机制研究具有非常重要的意义。对于甘蔗叶片及茎 秆组织超微细胞结构研究表明，在甘蔗叶片韧皮部装载过程中，存在质外体装载途径；在维 管组织向贮藏薄壁细胞卸载过程中存在质外体途径维持一种蔗糖的浓度梯度[11,12] 。蔗糖的质 外体运输途径需要蔗糖转运蛋白的介导，因此在甘蔗体内必然存在蔗糖转运蛋白基因。本文 采用 RACE 技术从甘蔗体内克隆出一种新型蔗糖转运蛋白基因 ShSUT4，并通过RT-PCR 技 术对其在甘蔗成熟植株不同组织内的表达进行了分析。 1 材料与方法 1.1 材料 甘蔗品种ROC22 、果蔗 （拔地拉）、福引 20 （福农 20 ）、福引 1720 （福农 1720）、粤糖 00-236 、粤糖 93-159 、ROC16 、ROC24 、ROC25 ，种植于中国热带农业科学院热带生物技 术研究所海口试验基地。5’RACE 试剂盒购自 Invitroge