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NMDA受体调节少突胶质前体细胞的分化 以及铜腙模型中的髓鞘再生过程 浙江大学医学院 神经生物学 博士研究生 李翠 导师 何成 中文摘要 成熟的少突胶质细胞是中枢神经系统内形成髓鞘的细胞。少突胶质细胞是由 少突胶质前体细胞(OPCs)分化形成的。在发育过程中，少突胶质前体细胞在大 脑内起源于非常局限的部位即室膜区，经过增殖、迁移、到达富含轴突的白质部 位，然后分化为成熟的少突胶质细胞，进而少突胶质细胞的突起包绕轴突起始髓 鞘的形成。在髓鞘受损后，OPCs激活，通过增殖、迁移募集到受损部位，然后分 化成为新的少突胶质细胞重新形成髓鞘实现髓鞘的再生，基本上重现发育中髓鞘 形成过程。近来病理学研究显示，在多发性硬化病人的慢性病灶处存在未成髓鞘 的少突胶质细胞和大量的OPCs，提示脱髓鞘病灶处的OPCs分化受阻，滞留在从 未成熟到成熟的分化阶段。这可能是髓鞘再生的限制性因素．因此深入研究OPCs 分化机制，有可能揭示髓鞘再生失败的原因，并对寻找治疗脱髓鞘疾病有效治疗 手段具有重要意义． 中枢神经系统的髓鞘形成过程是少突胶质细胞与被它包绕的轴突之间相互影 响、紧密联系的复杂过程。大量研究显示，神经元以及轴突可通过释放神经递质 直接影响少突胶质细胞发育的各个阶段以及髓鞘的形成，还可以通过刺激星型胶 质细胞间接调控这个过程。神经元动作电位以及星型胶质细胞和白质部位未髓鞘 化的轴突都可释放谷氨酸，但是对于这些谷氨酸的作用还不清楚。最近多家实验 室的研究结果显示，功能性的NMDA受体在少突胶细胞的各个发育阶段都有表 达，并参与介导髓鞘的损伤．但是对于NMDA受体在少突胶质细胞的分化以及髓 鞘形成过程中的作用还待研究。NMDA受体主要定位在少突胶质系的细胞突起上 尤其是髓鞘膜上，而AMPA受体以及KA受体主要分布在胞体上．这些证据提示， Ill NMDA受体可能参与谷氨酸调节的少突胶质细胞的分化以及髓鞘形成过程。 为了研究NMDA受体在少突胶质细胞上的作用，我们首先运用免疫化学的方 法，检测了体外培养的细胞以及在体的脑片上NMDA受体亚单位GluNl、 GIuN2A，GluN2B的表达． 的未成熟少突胶质细胞以及MBP阳性的成熟少突胶质细胞上都有GIuNI、 GluN2A、 GluN2B亚单位的表达，进一步用WesternBlot的方法在体外培养的少 GIuN2B蛋白的表达。利用体外纯化 突胶质细胞中检测到了GIuNI，GIuN2A、 培养的SD大鼠OPCs体系，我们发现NMDA刺激可剂量依赖性的调节少突胶质 细胞髓鞘蛋白MBP的表达．而给予NMDA受体的拮抗剂或用RNA干扰的方法 激可促进少突胶质细胞突起生长使其形态更复杂。 通过检测少突胶质细胞系阶段 受体主要在调节少突胶质细胞从04、01阳性的未成熟阶段向MBP，MOG阳性的 成熟阶段分化过程中发挥作用． 运用DRG／OPCs的共培体系，给予NMDA刺激 可增加髓鞘的节段数，说明NMDA受体参与调节髓鞘形成过程。针对铜腙诱导 的毒性脱髓鞘小鼠模型，在髓鞘再生阶段给予NMDA受体的拮抗剂MK801，通过 LFB．PAS染色、髓鞘蛋白免疫组化以及电镜检测，可以观察到髓鞘再生明显受到 抑制。这些结果提示NMDA受体参与调节铜腙模型中的髓鞘再生过程。通过检测 能通过抑制少突胶质细胞的分化从而延缓髓鞘的再生，并不影响激活的Ibal阳性 的小胶质细胞以及GFAP阳性的星型胶质细胞的细胞数目。 综上所述，我们的实验结果显示NMDA受体参与调节少突胶质前体细胞的分 化以及髓鞘形成，同时在铜腙诱导的脱髓鞘模型的髓鞘再生过程中发挥作用，这 一研究提示NMDA受体有可能作为治疗脱髓鞘性疾病的标靶。 关键词：NMDA受体，少突胶质前体细胞，髓鞘形成，脱髓鞘，髓鞘再生，铜腙模 型 IV NMDARsdifferentiationof regulate oligo