酚化合物对胰岛素淀粉样纤维化的抑制作用.pdfVIP

Vol.36 高等 学校 化 学 学报 No.7 2015年7月 CHEMICALJOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 1310 ~1314 doi:10.7503/ cjc 酚化合物对胰岛素淀粉样纤维化的抑制作用 张玉洁,曹 娜,曾成鸣 (陕西师范大学化学与化工学院,西安710119) 摘要 采用牛胰岛素作为模型多肽分子,对几种结构相近的简单多酚的抗多肽淀粉样纤维化作用进行了研 究. 结果表明,邻苯二酚和对苯二酚对胰岛素纤维化具有抑制作用,并通过形成醌中间体对多肽链进行修 饰,与对苯醌作用类似;而苯酚和间二苯酚在相同条件下,既不能修饰多肽也无抑制纤维化作用. 在无氧条 件下,邻苯二酚和对苯二酚对胰岛素纤维化的抑制作用明显降低,说明酚化合物经氧化形成的醌中间体是 其抗胰岛素纤维化的主要活性结构. 关键词 酚化合物;胰岛素;淀粉样纤维化;醌;醌修饰肽 中图分类号 O625;Q949.64 文献标志码 A 很多蛋白质或多肽在一定条件下可以形成淀粉样纤维,至少20 多种人类疾病如阿尔茨海默病、帕 金森氏病、家族性淀粉样神经病变以及Ⅱ型糖尿病等与此类淀粉样纤维沉积有关[1~4]. 胰岛素是一种 由51个氨基酸残基组成的多肽,极易形成淀粉样纤维,通常将其作为研究多肽淀粉样纤维化、筛选抗 [5] 纤维化药物以及纤维细胞毒性分子机制的模型分子 . 虽然目前尚无证据表明任何疾病与胰岛素纤维 化有关,但在临床应用中,胰岛素在生产、储存过程中以及在注射部位形成的纤维可能对病人产生免 [6] 疫原性 . 为抑制蛋白质淀粉样纤维化,溶解或者破坏淀粉样纤维结构被认为是治疗相关疾病的有效途径. 多酚化合物,特别是一些天然多酚类物质可以抑制蛋白质的纤维化[7~9] ,并能够破坏成熟的纤维结构, [10] 将其转变为无定形聚集体,降低纤维的细胞毒性作用 . 这些多酚的抗多肽纤维化作用被认为既与其 多环和多羟基结构有关,也可能与其抗氧化作用或促氧化作用有关[11,12] ,但具体作用机制尚无定论. 本文采用牛胰岛素作为模型分子,探索了几种结构相近的简单多酚化合物对多肽淀粉样纤维化的 抑制作用,以期从这些化合物的构效关系来揭示多酚类化合物抗多肽淀粉样纤维化的分子机制. 1 试验部分 1.1 试剂与仪器 牛胰岛素(分子量5733)、硫黄素(ThT)、氯化硝基四氮唑蓝(Nitroblue NBT)、酚化合物及对苯醌 购自Sigma-Aldrich公司;电泳相关试剂购自Bio-Rad公司;其它试剂均为国产分析纯. LS-55型荧光分光光度计(美国Perkin-Elmer 公司);JEM-1400 型透射电子显微镜(日本JEOL 公司). 1.2 实验过程 1.2.1 胰岛素淀粉样纤维的制备 用20 mmol/ L盐酸溶液(pH=1.7)配制100 μmol/ L牛胰岛素水溶 液,加入不同浓度的酚化合物,于50 ℃水浴中孵育5 d,按一定的时间间隔取样并在4 ℃保存备用. 1.2.2 ThT 荧光检测 用10 mmol/ L磷酸盐缓冲液(pH=7.0)配制1mmol/ LThT溶液,于4 ℃避光保 存备用. 取10 μL孵育的胰岛素样品,加至10 mmol/ L Tris-HCl溶液(pH=8.0)中,再加入30 μL ThT 溶液使其终浓度为10 μmol/ L,振荡10 s左右,用荧光分光光度计记录荧光强度(激发波长为440 nm, 收稿日期:2015-01-26. 网络出版日期:2015-06-03. 基金项目:中央高校基础研究基金(批准号:G资助. 联系人简介:曾成鸣,男,博士,教授,博士生导师,主要从事蛋白质化学方面的研究. E-mail:chengmingzeng@snnu.ed