里氏木霉中小分子RNA对纤维素酶表达调控的作用.pdfVIP

生 物 技 术 通 讯 LETTERSINBIOTECHNOLOGY Vol.26No.4 Jul.,2015 535 doi: 10.3969/j.issn.1009-0002.2015.04.020 研究报告 里氏木霉中小分子RNA对纤维素酶表达调控的作用 1 1 1 2 1 梁智伟 ，王娟 ，田生礼 ，王立岩 ，刘刚 1. 深圳市微生物基因工程重点实验室，深圳大学 生命科学学院，广东 深圳 518060；2. 深圳市海洋生物资源与生 态环境重点实验室，深圳大学 海洋科学系，广东 深圳 518060 ［摘要］ 目的：通过过表达小分子RNA和抑制小分子RNA功能，研究小分子RNA对里氏木霉QM9414纤维素酶表达 的影响。方法：利用含里氏木霉强启动子Ppdc的质粒p-Ppdc-Tcbh1，分别构建过表达载体和Tough Decoy（TuD）序 列，对里氏木霉QM9414的3个小分子RNA（milR5、milR7和milR10）进行过表达和抑制，过表达和抑制后的小分子 RNA表达量通过荧光定量PCR检测，最终测定转化菌株的滤纸酶活，研究过表达和抑制小分子RNA后对纤维素酶表 达的影响。结果：过表达载体能提高小分子RNA的表达量，过表达重组菌株OE-milR7的滤纸酶活明显提高；TuD序 列表达载体可抑制小分子RNA的功能，抑制小分子RNA的重组菌株TuD7酶活略有下降。结论：milR7可能参与纤 维素酶表达调控，为对里氏木霉的产纤维素酶能力进行改造提供了新的靶点。 ［关键词］ 里氏木霉；非编码小分子RNA；TuD；纤维素酶 ［中图分类号］ Q78 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1009-0002（2015）04-0535-06 Study on the Regulation Fuction of Small RNAs on Cellulase Ex⁃ pression in Trichoderma reesei 1 1 1 2 1 LIANG Zhi-Wei, WANG Juan, TIAN Sheng-Li, WANG Li-Yan, LIU Gang * 1. Shenzhen Key Laboratory of Microbial Genetic Engineering, College of Life Sciences, Shenzhen University, Shen⁃ zhen 518060; 2. Shenzhen Key Laboratory of Marine Biotechnology and Ecology, Department of Marine Sciences, Shenzhen University, Shenzhen 518060; China *Corresponding author, E-mail: zjuliug@szu.edu.cn ［Abstract］Objective: By over-expressing the small RNAs and inhibiting the small RNAs function, investigating the regulation function of small non-coding RNAs on cellulase expression in Trichoderma reesei QM9414. Meth⁃ ods: For studying the effect of over-expressing 3 small RNAs（milR5, milR7 and milR10）and inhibiting its func⁃ tion on cellulase expression in T.reesei QM9414, the plasmid