重组大肠杆菌共表达亮氨酸脱氢酶和甲酸脱氢酶发酵条件优化.pdfVIP

第 １３卷第４期 生　 物　 加　 工　 过　 程 Ｖｏｌ１３ Ｎｏ４ ２０１５年７月 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｊｕｌ２０１５ － ｄｏｉ：１０３９６９／ ｊｉｓｓｎ１６７２ ３６７８２０１５０４００５ 重组大肠杆菌共表达亮氨酸脱氢酶和甲酸脱氢酶 发酵条件优化 １ ２ ３ ３ ３ １ １ 刘维明 ，杨震炯 ，罗积杏 ，壮晓健 ，沈文和 ，胡　 燚 ，黄　 和 （１ 南京工业大学 生物与制药工程学院，江苏 南京 ２１１８００；２ 浙江省永康市质量监督检测中心， 浙江 永康 ３２１３００；３ 浙江九洲药业股份有限公司，浙江 台州 ３１８０００） 摘　 要：在摇瓶中对共表达亮氨酸脱氢酶（ＬｅｕＤＨ）和甲酸脱氢酶（ＦＤＨ）的重组大肠杆菌（Ｅｃｏｌｉ）的发酵条件进行 优化。 首先考察基础培养基中碳、氮源种类和浓度及初始ｐＨ等因素对重组大肠杆菌生长和产酶的影响，实验结果 表明甘油和酵母膏为最佳碳源和氮源，最适质量浓度均为１０ ｇ／ Ｌ，培养基最适初始ｐＨ 为８０。 然后对诱导条件进 行优化，确定最适的诱导时机为菌体密度（ＯＤ ）达到０６时，最适的诱导温度、诱导剂ＩＰＴＧ 浓度和诱导时间分别 ６００ 为２５ ℃、０２ ｍｍｏｌ／ Ｌ和２０ ｈ。 在优化后的培养条件下，菌体密度（ＯＤ ）可达８６，ＬｅｕＤＨ和ＦＤＨ酶比酶活分别达 ６００ １５４３３和２ ５７２４ Ｕ／ Ｌ，是优化前的２０和３１倍。 关键词：重组大肠杆菌；亮氨酸脱氢酶；甲酸脱氢酶；诱导 － － － 中图分类号：Ｑ５５４　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２ ３６７８（２０１５）０４ ００２３ ０６ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＥｃｏｌｉ ｆｏｒ ｃｏｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｌｅｕｃｉｎｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ａｎｄ ｆｏｒｍａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ １ ２ ３ ３ ３ ＬＩＵ Ｗｅｉｍｉｎｇ ，ＹＡＮＧＺｈｅｎｊｉｏｎｇ ，ＬＵＯＪｉｘｉｎｇ ，ＺＨＵＡＮＧ Ｘｉａｏｊｉａｎ ，ＳＨＥＮ Ｗｅｎｈｅ ， ＨＵ Ｙｉ ，ＨＵＡＮＧ Ｈｅ１ １ （１Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｔｅｃｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１１８００，Ｃｈｉｎａ； ２Ｑｕａｌｉｔｙ Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ ａｎｄ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｙｏｎｇｋａｎｇ，Ｙｏｎｇｋａｎｇ ３２１３００，Ｃｈｉｎａ； ３ＺｈｅｊｉａｎｇＪｉ