重组大肠杆菌产NAD激酶发酵条件的优化研究.pdfVIP

第卷第期 工业微生物 　 ４５ ３ 　 Ｖｏｌ．４５ Ｎｏ．３　 　 ２０１５年６月 Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｊｕｎ． ２０１５ ｄｏｉ １０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－６６７８．２０１５．０３．００７ ： ＮＡＤ 重组大肠杆菌产 激酶发酵条件的优化研究  侯，李红梅　 　 ２０００９３ 上海理工大学医疗器械与食品学院，上海杨浦 摘　 要：本研究将重组大肠杆菌Ｅ． ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）／ ｐＥＴ３０ （＋）ＮＡＤＫ 作为ＮＡＤ激酶生产菌 α 种，对其产酶发酵培养基及发酵条件进行优化。采用ＰｌａｃｋｅｔＢｕｒｍａｎ（ＰＢ）设计先筛选出影响重组 ＮＡＤ ＭｇＳＯ 菌产 激酶的三个主要因素：葡萄糖浓度、 浓度和诱导表达时间，试验结果表明，增加葡４ ＭｇＳＯ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ 萄糖和 的浓度及缩短诱导表达时间对产酶有利。根据中心组合实验设计（ ４ Ｄｅｓｉｇｎ，ＣＣＤ）原理，利用ＰＢ设计确定的这三个显著影响因素，通过最陡爬坡实验逼近最大响应区 域，挑选出实验范围内的最优点，以此作为响应面中心组合设计的中心点，用ＮＡＤ激酶酶活作为响 Ｄｅｓｉｇｎ Ｅｘｐｅｒｔ ８．０ 应值，使用 软件设计中心组合实验，通过对实验数据进行分析，得出最佳发酵培 养基成分及发酵条件为：葡萄糖１４．２４ ｇ／ Ｌ、酵母粉８ ｇ／ Ｌ、胰蛋白胨８ ｇ／ Ｌ、ＭｇＳＯ ０．９４ ｇ／ Ｌ、ＮａＣｌ ５４ ｇ／ Ｌ、ＮＨ Ｃｌ２ ｇ／ Ｌ、ＫＨ ＰＯ ２ ｇ／ Ｌ、Ｋ ＨＰＯ ９ ｇ／ Ｌ，诱导表达时间８．３４ ｈ，接种量２％。在此最佳条件 ４ ２ ４ ２ ４ ＮＡＤ １０．１７ Ｕ／ ｍｇ ２．７７ 下， 激酶酶活实验验证值可达 ，与优化前相比提高了 倍。对诱导表达结束后 的细胞上清液进行ＳＤＳＰＡＧＥ分析也证明优化取得了显著的效果。 关键词：重组大肠杆菌；ＮＡＤ激酶；ＰＢ设计；响应面设计 ［］６ 　 　 在生物体内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（ＮＡＤ）和 ＡＴＰ再生酶组合催化ＮＡＤ合成为ＮＡＤＰ 。２０００ 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（ ）以及它们的还 年， 等首次鉴定了结核分支杆菌 的 ＮＡＤＰ Ｋａｗａｉ Ｈ３７Ｒｖ ｐｏ 原型 和 是合成许多代谢产物所必需 ｌｙ（） 激酶 激酶基因，发现这一酶 ＮＡＤＨ ＮＡＤＰＨ Ｐ ／ ＡＴＰＮＡＤ ＰｐｎＫ