小鼠卵慢速和快速降温及玻璃化冻存的比较研究.pdfVIP

维普资讯 一 7 8 2、 L ／ 动 物 学 研 究 1996，17 (1)}68—74 CN 53—1040／Q ISSN 0254—5853 ZoologicalResearch 小鼠卵慢速和快速降温及玻璃化冻存的 比较研究 季维智 陈建春 ／商恩缘 杨上川 门红升 邹如金 ‘ 帅圄科学院 动物研究所 昆明细胞库 昆明 蚴 孑广7 斤 ’ ／一J ／ 摘要 本文用4种冷冻模式：慢速降温 (sL)，超快速降温 (Q1)和防冻剂组成不同的玻抽 化法 (R—FVM 和 MVM)对昆明小鼠卵进行冷冻保存的比较研究，并用体外受精技术检测冷 冻 复苏卵的受精能力。 sL和 R FVM 的存活率分别为 551±1．2和 659±7．9，显著高于 O1 (24．2±7．3)和 MVM (4．5124)其受精率分别为 72．8±1．8和 739±0．4显著高于 O1(586± 112)和 MVM (415±85)，而与对照组 (77．5±39)相似。结果表 明：1)慢速降温程序 (sL)和同时含有渗透性和非渗透性防冻荆的玻璃化法 (F—RVM)鞍适宜昆明小鼠卵的冻存I 2)同时考虑冻存过程 中的冰晶损伤和渗透压损伤是获得较好冻存结果的关键。 L0 关键词滕 r卵—母——细——胞～，、冷———冻—-保—存～ 自人精子细胞冷冻保存成功以来 (Polge等，1949)，有关细胞冷冻保存的研究已取 得很大的进展。然而，与精子和胚胎相 比，哺乳动物卵的冷冻保存仍然不太成功。虽然 已 有一些动物如小 鼠 (Surrey等， 1990；Shaw等 ，1991；Friedler等， 1987~Mazur等 ， 1984)；兔子 (Diedrich等，1986)}牛 (Niemann， 1991) 和人 (Quinn等， l986； Trounson，’1986)卵冻存成功 的报道 。但 在不 同的实验室 ，其冻存效果 却很不相 同 (Rail，198％ Massip等，1986；Mazur，1984)。许多问题还有待于深人研究。据 目前 所知，影响卵冻存效果的主要因素可能是防冻剂组成、降温和复苏速率 (Friedler等， 1988)。本文利用我国常用的实验动物 昆明小鼠为材料，用 4种不同的冷冻模式 (慢速程 控、超快速降温和两种不同的玻璃化法)，对其卵进行冷冻保存的比较研究，并用体外受 精 (invitrofertilization，IVF)检测冷冻复苏卵的受精能力，探讨降温速率和防冻剂对 卵冻存的影响。 l 材料和方法 实验用小 鼠为 昆明品系，帷鼠 4—8周龄 ，雄 鼠 l0一 l5周龄 (本所动物 中心提供 )。 实验用水为三蒸水经超纯水器 (NANOpureultrapurewatersystem)处理，标定阻值大 干 l7MQ。 ·云南省应用基础研究基金资助项 目 本文 1995年 2月 24日收到，同年 5月 l0日修 回 维普资讯 1期 季维智等：小 鼠卵慢速和快 速降温及玻璃化冻存的 比较研究 69 l_l 卵的获取 雌 鼠腹 腔注射 101U PMSG (长春生物制品所)，48—50h后腹腔 注射 101U hCG (-ft京动物所)。hCG 注射后 14h处死小鼠，取 出输卵管放入 Hp—HTF培养液 (Surry 等，1990)中，用针刺破输卵管腹壶部挑出卵团，