儿茶素对酸介导神经元损伤的保护作用及机制的研究.pdf

郑州 大学 2009 届硕 1 论文 儿茶素对酸介 导神经儿损伤 的保护作用及其机制研 究 摘 要 儿茶素对酸介导神经元损伤 的保护作用及其机制研 究 研 究生 栗 建新 导 师 张 艳 教 授 郑州大学基础 医学 院药理学教研 室 河 南 郑州 4 50052 摘 要 目的 缺血性脑血管疾病是严重危害人类健康 的一类疾病，其死亡率及致残率 均较 高 。目前 临床缺 乏有 效 的理想治疗药物 ，因此在缺 血性脑血管疾病 的治疗 方 面在 开展溶栓 治疗 的 同时积 极寻找有效 的脑保护 药物 具有重要 的意义 。大量研 究 证 明 : (+)一儿茶素有较 强 的清 除 自由基 的作用 ，提 高细 胞 内抗氧化 酶 的活 力来抑 制氧 化损伤 ，从而对缺血性脑血管疾病有一定 的治疗 作用 。(+)一儿茶素是儿茶素 中的一种单体 ，儿茶素异构体及其衍生物 的生物 活性有许 多共 同之处 ，然 而它们 之 间化 学结构及立体 构型 的差异使其生物活性 不尽相 同。立体结构不 同影 响着化 合物 的生物 活性特 点 。(+)一儿茶素表现 出更强 的抗氧化 活性及更弱 的细胞毒作用 。 近年来研 究发现酸敏感离子通道 (aeid一sensing ion ehann els，A sxe s) 在缺血性脑 损伤 病 理生理过程 中发挥着重要 的作用 。越来越 多的研 究表 明 :AS ICs 参 与 了神 经 中枢 多种 生理 、病 理 过程 ，包括 :情 绪 、学 习和 记忆 等脑 高级功 能 、脑 缺 血损 伤 以及 脑肿瘤 等等 。酸敏感 离子通道 是一类 由氢 离子 (H+)激 活 的配体 门控 阳离 子 通道 。但 (+)一儿茶素 能否通 过影 响脑神经元 A sIC la 通 道 发挥脑保护 作 用 ， 目前 国 内外 尚未见报 道 。鉴 于此 ，本试验 从细胞及 分子 水平 上 ，通过体外培养 大 鼠皮 层 神 经 元 建 立 “酸环 境 ”损伤 模 型 ，观 察 (+)一儿 茶 素对 神 经 元 的保 护 作用 并进 一 步探 讨 其保 护作用机制 。 方 法 大 鼠皮层神经元原代培养 ，用阿糖胞普抑制非神经元细胞 的生长 ，神经 元特 异性烯 醇化酶困SE)鉴定并确 定其纯度 。取培养6d 的细胞 ，随机 分组为 : ① 正常 组 ; ② 酸环 境 损伤 组 ; ③ (+)一儿茶素 高 、 中、低 剂 量组 (l.伍扭no比 、0.5~ OFL 、 0.25nunolLj )。正常对 照 组常规换液一次 ，其余各组细胞 除去原培养液 ，用D 一H 田Ik ’s 郑州大学 2009 届硕 卜论文 儿茶素对酸介 导神经元损伤 的保护作用及其机制研 究 摘 要 液椒 遍后 ，酸环境损伤组加入pH 6.O 的低糖D M EM 液，在酸环境处理过程 中，各给 药组分别加入含不 同剂量 (+)一儿茶素低糖D M E M 液 ，置培养箱 中37 ℃、5% C O Z、 饱和湿度 下培养6h ，模拟 由于体 内缺血缺氧而形成 的酸环境 。酸环境处理6h后 ， 倒置显微镜 下进行一般形态学观察 ; 比色法检测细胞 的H 20 2和M D A 含量 ; RT 一 PC R 法检测 皮层神经元 的酸敏感离子通道 1a(A sIc 1a)m R N A 表达情 况 。 结果 (l) 损伤 组细胞培养液 中 H ZO :含 量 (1巧.57 士6.16~ oFL ) 明显增加 ，与 正常组 (73 .巧 士2.81 ~ ol/L ) 相 比，差 异有 统计 学 意义 (P 0.01); (+)一儿 茶 素 高剂 量 组 、 中剂 量组 、低 剂量组细胞培养 液 中 H Zo :含量 (90 .34 士5.31~ ol/L 、 100 5·0 士4.osnun ol几 、102.39 士5.56nun o 比 )减少 ，与损伤组相 比，差异有 统