微生物实验安排.pdfVIP

第一天 培养基的配制和灭菌（周五下午） 1、器皿灭菌前的准备 （每组派2-3 人 A 操作）： ①洗涤 将实验所用到的玻璃 器皿先洗干净，烘干备用。②包装 A 枪头+枪头盒（本实验使用移液枪） 包装 好，待灭菌（湿热灭菌）。B 培养皿 每组包 10 套培养皿。将洗净晾干的培养皿 皿底朝里，皿盖朝外，5 套、5 套相对而放好，然后用报纸包好，待灭菌（干法 灭菌）。C 取 6 支试管并加入 9 （mL/支）蒸馏水后盖上硅胶塞，待灭菌；取 1 个 250mL 锥形瓶并加入 90 （mL/瓶）蒸馏水和 15 （颗/瓶）玻璃珠并用锡纸包 好，放在铜丝篓中待灭菌（湿热灭菌）。 2、培养皿采用干法灭菌：将包好的培养皿放到烘箱中，于 160℃下烘2 h。待温 度降到100℃下后打开烘箱门冷却到60℃后拿出，待用。（每组派2-3 人 A 操作） 3、培养基的配制（每组派2-3 人 B 操作）：A 往干净的 250m L 烧杯中加入 100mL 蒸馏水（每组配 200mL 培养基），按照培养基配方称取各种成分（琼脂粉待调好 pH 值后再加入），依次加入水中加热溶解。B 调节 pH 值 用质量浓度为 100g/L 的NaOH 溶液将配好的培养基的 pH 调到 7.2-7.4 。然后加入琼脂粉加热溶解，待 全部溶解后，加水补足因加热蒸发的水量（注意：加热过程中要不断搅拌培养基， 不然琼脂很容易烧焦糊底）。（注意：调pH 值时应缓慢加入 NaOH 溶液，并边加 边搅拌，不时用 pH 试纸测试）。C 分装锥形瓶 将烧杯中已经溶好的培养基分装 到锥形瓶中，分装量一般不超过锥形瓶总容量的 3/5 。每组取2 支试管，倒入 5mL 培养基加硅胶塞后湿热灭菌（做斜面用）。D 用锡纸将锥形瓶口封好，灭菌。（湿 热灭菌）。 4、湿热灭菌 （每组A 和 B 各派 1 人）：将需要湿热灭菌的包好的器皿、稀释水 和培养基放到灭菌桶内的筛板上（或灭菌器的吊篮内）于 121℃（0.103MPa）下 灭菌15-20min。 5、倒平板：将灭菌好的冷却至 50℃的培养基倒入培养皿中（约10-15mL/皿，每 组10个皿），使凝固成平板。（3人A） 第二天 细菌的纯种分离、培养（周六上午） 1、称 10 g 土壤或河道底泥或湖泊底泥放到装有玻璃珠和 90mL 灭菌水的锥形 瓶中，以 150rmp 的转速振荡20 分钟，以分散细胞。（3 人 A ） 2 、用定量移液器（移液枪）从三角瓶中吸取 1mL土壤悬液到装有 9mL无菌水 -2 的稀释液；再换一支无菌移 的试管中，吸吹 3 次，让菌液混合均匀，即得 10 -2 液管吸取 1mL10 的稀释液，到装有 9mL无菌水的试管中，吸吹 3 次，让菌液 -3 -2 -3 -4 -5 -6 混合均匀，即得 10 的稀释液；依此类推，分别制成 10 、10 、10 、10 、10 、 -7等一系列稀释液，待用。（3 人A ） 10 -5 3、涂布：本实验做三个不同浓度的处理。将各平板（实验一中制好）按 10 、 -6 -7 10 、10 编号，每处理两个重复，留 1 套平板为空气对照（剩下 3 套平板待第 二天纯化用，但需放置于超净工作台中并开启紫外灯灭菌）。用无菌移液管按 -7 -7 无菌操作要求吸取 10 稀释液 1mL到编号为 10 的培养皿中，再用无菌三角刮 刀将菌液在平板上涂抹均匀。依此类推，给其它浓度的平板涂布。空白对照不 用涂布。（注意：由低浓