氨基胍对大鼠脑缺血的保护作用机制及研究.pdf

中文 摘 要 氨基肌对大鼠脑缺血的保护作用及其机制的研究 摘 要 脑血管疾病是严重危害人类健康的疾病，是人类致残和死亡的重要原 因之一，其中以缺血性脑损伤最为多见。目前，临床上治疗脑缺血是以溶 栓为主，但一部分病人在脑卒中后给予溶栓治疗，其治疗效果不十分理想， 因此研究和开发能有效的治疗缺血性脑损伤的药物已成为临床和基础研 究的新热点。 近年来，一氧化氮 (NO)在急性脑缺血损伤中的双重作用倍受关注， 其既表现为神经保护作用，又有神经毒性作用，NO以L一精氨酸为底物， 在一氧化氮合酶 (NOS)专一催化作用下生成。氨基K(AG)是选择性诱 生型一氧化氮合酶 (iNOS)抑制剂，以往研究表明AG可减轻局灶性脑 缺血大鼠神经症状，缩小脑缺血面积，减轻脑水肿，显示了良好的脑保护 作用。本实验拟采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血损伤模型，通过对二种 类型NOS基因表达、脑组织中兴奋性和抑制性氨基酸含量变化、细胞凋 亡、线粒体的检测及培养神经细胞缺血性损伤，进一步探讨AG对脑缺血 的保护作用及其机制。 第一部分 大鼠局灶性脑缺血后一氧化氮合酶基因表达的变化 目的:观察大鼠局灶性脑缺血后3种类型NOSmRNA,即内皮型NOS (eNOS)、神经型NOS(nNOS)及诱导型NOSONOS)基因表达的变 化。 方法:健康雄性SD大鼠随机分为:正常对照组、缺血2h,6h,12h 和24h组，每组5只。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉梗塞 (MCAO) 局灶性脑缺血模型。大鼠断头取缺血侧脑组织，以逆转录一聚介酶链反应 (RTPCR)法分别检测脑缺血0h,2h,6h,12h,24h时eNOS,nNOS 及iNOS基因表达的变化。 结果:1.正常对照组可见eNOSmRNA表达 ((0.44士0.08),脑缺血 后2h表达(0.93士0.04)明显增强，与正常对照组比差异有显著性(P0.01), 中文 摘 要 并达到高锋，缺血后6.12h表达 ((0.60土0.03,0.58士0.05)逐渐减弱， 但仍显著高于正常对照组 (P0.05)，缺血后24h(0.48士0.06)与正常对 照组比无显著性差异。2.正常对照组可见 nNOSmRNA表达 (0.35+ 0.03)，脑缺血后6h(0.87士0.07)达到高锋，与正常对照组比差异有显 著性 (P0.01)，缺血后 12h表达 (0.48士0.03)逐渐减弱，但仍显著高 于正常对照组 (P0.05)，缺血后24h(0.37士0.04)与正常对照组比无显 著性差异。3.正常对照组未见iNOSmRNA表达，脑缺血后2h开始表达 (0.41士0.04)，缺血后12h(0.81士0.08)达到高锋，与缺血2h比差异 有显著性 (P0.01)，缺血后24h表达 (0.74士0.07)逐渐减弱，但仍显 著高于缺血2h组 (P0.05). 结论:大鼠MCAO后早期eNOS和nNOS占主要地位，缺血后期iNOS 占主要地位。 第二部分 氨基肛对脑缺血大鼠脑组织氨基酸含量的影响 目的:观察氨基肌 (AG)对脑缺血大鼠脑组织中氨基酸含量的影响， 来探讨AG对缺血脑组织的保护作用及其作用机制。 方法:雄性SD大鼠，随机分为:假手术组，缺血2、6.12h组， 缺血2、6.12hAG治疗组，每组6只。AG治疗组按l00mg/kg,ip给药 3d，每天2次，缺血组给等容量的生理盐水。采用线栓法制备大鼠大脑中 动脉脑缺血模型，假手术组只作颈部切开，分离颈总动脉但不插线拴。相 应时间点断头取脑，TTC法测定脑梗死体积，高效液相色谱仪分析检测 大鼠脑组织缺血侧纹状体、海马、皮层中天门冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、 x一氨基丁酸 (GABA)含量。 结果:1.缺血2h治疗3dAG组梗死体积/全脑体积 (IV%)明显低 于缺血组(P0.01)，缺血6h治疗3dAG组IV%明显低于缺血组(P0.05), 缺血12h治疗3dAG组IV%显著低于缺血组 (P0.01)。2缺血2h治 疗3d大鼠脑组织中氨基酸含量的变化:缺血组纹状体、海马、皮层中天 〕「冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、GABA的含量明显高于假手术组(P0.01),AG 组纹状体、海