丹参素对氧化低密度脂蛋白致血管平滑肌细胞增殖和凋亡影响和机制.pdf

摘要 摘要 目的： 通过研究丹参素对氧化低密度脂蛋白(OX．LDL)致血管平滑肌细胞增殖及凋 亡的影响，探讨丹参素在动脉粥样硬化中所起的保护作用及可能机制，使中药 的运用更具有现代医学的实验基础，为弘扬祖国医药学作出贡献。 方法： 1．大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMCs)的原代培养和鉴定：取Wister大鼠胸主动脉， 用反复贴块法培养大鼠VSMCs，用光镜和免疫组化鉴定。培养5．10代用于实验。 2．氧化低密度脂蛋白的制备：将购买的低密度脂蛋f刍(LDLl，取少量行Lowry 法蛋白含量测定。采用铜离子氧化。用丙二醛(MDA)测定法测定处理前后的 LDL中MDA含量以确定LDL是否氧化成OX．LDL。 3．丹参素(DSS)的制备：取10 mg丹参素钠溶于5mlPBS中，0．2劾Ill微孔滤 膜过滤除菌后4℃冰箱保存备用。 个细胞接种于96孔板中，分10组，每组六个孔。用含10％胎牛血清(FBS)的 DMEM培养两天后换用无血清DMEM培养次日各组换用含5％FBSDMEM并分 验重复6次，并以每组各孔平均OD值绘制增殖曲线。 5．不同浓度DSS对OX．LDL促VSMCs增殖的影响：收集细胞以每孔2x103个 细胞接种于96孑L板中，分4组，每组六个孔。培养三天后(方法同前)各组分 DMEM；②5％FBS 别处理如下：①5％FBS OX．LDL；③5％FBS DMEM+50mffl DMEM+50mg／Iox—LDL+50DSS；4(．D5％FBS OX．LDL+100 mg／L DMEM+50mg／l DSS，24小时后通过MTT法检测OD值。以上实验重复三次。收集细胞以 mg／L 每孔6x104个细胞接种于6孔板中的四个孔中，培养三天后各孔分别处理如下： ①5％FBSDMEM；②5％FBS OX—LDL；③5％FBS DMEM+50mg／l DMEM+50m∥l OX-LDL+50 OX-LDL+100 DSS，20小时 mg／LDSS；④5％FBS mg／L DMEM+50m∥l 后分别提取四孔中细胞mRNA，RT反转录后cDNA经特异性引物再PCR，以 m GAPDH作内标，测定每组PDGF．BBRNA的表达水平。以上实验重复三次。 lI 摘要 DMEM； 6孔板中的4个孔中，培养三天(方法同前)后分别干预如下：①5％FBS (爹5％FBS OX—LDL；③5％FBS OX-LDL+50 DMEM+100mg／I DMEM+100mg／I OX-LDL+100 DSS，16小时后观察各 mg／LDSS；④5％FBSDMEM+100mg／Img／L 孔细胞生长形态并拍摄，收集各孔细胞，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。实验重 复6次。 据均采用方差分析(F检验)，P0．05：有显著性差异。 结果： 1．原代大鼠主动脉平滑肌细胞