绵羊肺炎支原体分离鉴定及全基因组序列测定和分析.pdfVIP

摘 要 绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae ，MO)可以引起绵羊和山羊的增生 性、间质性胸膜肺炎。在全世界有蔓延的趋势，给养羊业造成了巨大的损失，所以 对羊支原体病的研究日益受到人们的重视，本试验从病原的分离鉴定、诊断方法和 药物防治等方面对MO 进行了研究，为生产上防治该病提供了依据。 1、通过对内蒙古四子王旗和达拉特旗的养羊场中疑似患有传染性胸膜肺炎的 羊只采集肺脏和胸水共33 份，对病料进行无菌剪碎、组织研磨并接种到改良Hayflick 培养基中，胸水用 0.22µm 滤器过滤后接种到改良 Hayflick 培养基中，之后通过培 养和纯化后得到 12 个分离物。通过染色镜检、生化鉴定和血清学鉴定，证实分离物 与绵羊肺炎支原体MO 标准株Y-98 为同种。 2 、将符合MO 的其中3 个菌株，参照NCBI 已知MO 的16SrRNA 的序列设计 一对可扩增700bp 片段的引物进行PCR 扩增，结果标准株Y98 和分离物D13 、D27 和XJ 均扩增出与预期结果相符的 700bp 片段。将电泳亮条带凝胶回收后测序。测 序结果显示所测序列与标准株 Y-98 的同源性分别为97.7% 、98.6%和 100%。该结 果确定了所得分离物为MO 的某一成员，证实以上两个地区羊场中导致羊传染性胸 膜肺炎的主要病原体为MO 。 3、本实验室首次采用通过酶标仪测定MO 液体培养物的OD450 处吸光值的方 法绘制了 MO 的生长曲线。通过对分离株 D13 、D27 、XJ 和标准株 Y-98 在改良 Hayflick 培养基、改良KM2 培养基、改良FM4 培养基、改良Hayflick 培养基和加 入添加剂（OXOID ）的支原体基础培养基的生长状况绘制了生长曲线，并通过分析 和比较，结果证明改良Hayflick 培养基是培养MO 的最佳培养基。 4 、本实验室选取了泰妙霉素、氟苯尼考、卡那霉素、洁霉素、恩诺沙星、新霉 素、四环素、链霉素、红霉素、庆大霉素和罗红霉素等 12 中抗菌药物，对3 个分离 株进行了敏感药物的筛选，其中卡那霉素、泰妙霉素、新霉素、恩诺沙星、氟苯尼 考和洁霉素6 种为高敏感药物，此结果表明此6 种高敏感药物可以作为防治内蒙古 四子王旗和达拉特旗MO 的首选药物。 5、本实验室对分离株中生长较好的一株绵羊肺炎支原体XJ 株进行了全基因组 测序，并对其进行基因家族分析，并通过基因预测和基因功能预测，对其全序列进 行分析和研究，为以后绵羊传染性胸膜肺炎的防治和疫苗研制提供了重要的依据。 关键词：绵羊肺炎支原体；分离；鉴定；全基因组 Isolation Identification of Mycoplasma ovipneumoniae and Genomic Sequence Determination and Analysis Abstract Mycoplasma ovipneumoniae (MO)is considered an emerging veterinary pathogen causing intersticial and proliferative pleuropneumonia in sheep and goats 。The disease appeared to be spreading in the world ， which caused great sufferings and losses to the sheep husbandry 。So people increasingly pay attention to the study on the disease infected by Mycoplasma ovipneumoniae 。A deep research was made on MO with isolation and identification of pathogen