内源性抗菌肽基因过量表达对家蚕抗病力影响研究.pdfVIP

摘要 内源性抗菌肽基因的过量表达 对家蚕抗病力影响的研究 微生物专业硕士研究生 蒙炳超 指导教师周泽扬教授 捅要 昆虫抗菌肽是昆虫免疫诱导产生的一系列小分子多肽，对昆虫的抗病能力起 着重要的作用。昆虫抗菌肽具有杀菌能力强、抗菌谱广等特点，而引起人们的普 遍关注。家蚕作为支撑蚕丝产业的重要经济昆虫，因此提高其抗病性的研究对提 高蚕丝生产有着重要的意义。家蚕是鳞翅目昆虫中的模式生物，国内外研究者已 该发挥着重要的作用。近年来，随着基因工程技术的发展，通过转基因手段培育 抗病性强的新品种成为新的育种研窥方向，人们把昆虫抗菌肽基因导入动植物染 色体，已经获得了抗病性强的转基因动植物，为选育高抗性的动植物品种作出了 重要的探索。 本研究基于本实验室构建的家蚕转基因技术平台，选择对革兰氏阳性菌与革 兰氏阴性菌有抗菌活性的家蚕Moricin2基因(NCBI 革兰氏阴性菌有抗菌活性的家蚕Lebocin3基因(NCBI 建转基因表达载体并导入家蚕基因组中，探索转内源性抗菌肽基因后对家蚕抗菌 能力和生长发育的影响。本研究获得的如下结果： 1．抗菌肽转基因表达载体的构建 将主要在家蚕脂肪体表达的SDH启动子与Morcin2基因构建成融合转基因 家蚕全身广谱表达的IEl启动子构建成两个融合转基因表达载体，即 2．转基因蚕的制作与分子检测 两南大学硕十学何论文 !II II； I皇曼曼曼曼!曼曼鼍曼曼曼曼曼皇蔓曼皇量曼曼量曼皇量曼曼雹曼曼曼皇量曼曼曼曼曼曼皇曼 进行荧光筛选，分别得到40、30、36头荧光蚕。 对每个阳性转基因家蚕品系随机抽取一个个体进行Southernblot检测，分析结 果表明，目的基因表达盒都已经整合到家蚕基因组上，即成功构建了SDH．Mor、 Ⅲ1．Leb和SDH．Leb转基因系。 因mRNA的相对表达量比对照显著提高，但是两个转基因系间差异不显著。 4．转基因蚕的抗菌能力分析和生长发育情况观察 对SDH．Mot转基因系和对照2龄起蚕添食苏云金芽孢杆菌，试验结果表明， 芽孢杆菌的抗性提高了约24．4％。 系对E．coli的抗性比对照分别提高了约20．57％和13．9％。 对转基因家蚕的生长发育情况进行观察，没有发现明显的异常现象。 关键词：抗菌肽家蚕转基因抗性 Ⅱ Abstract on of StudyoVerexpressionendogenous antibacterialeffectsonthe peptides antibacterialof mori activityBombyx Masterof Meng Microbiology：Bingchao Su|：rosivrepuS)roZeyangsseforP(uohZ 110urotessor Abstract Theinsectantibacterialissmall—molecule whicha peptide polypeptidesplaysvery roleinthe ofinsectresistance．Becauseofits antibacteficidal important process strong andwideantibacterial attractsattention capacity spectrum，it m