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烟酰胺合酶基因的导入对甘蓝型油菜盐碱胁迫的响应 摘要 油菜是世界四大油料作物之一，具有适应性强、用途广泛、经济价值高、发展潜力大 的特点，因此一直备受众多育种学家的关注。随着世界环境的日益恶化，可利用的土地资 源同趋减少，如何有效地对盐碱土进行合理利用已经成为众多国家和地区所密切关注的热 点问题。早期使用传统育种手段对油菜进行抗逆良种培育，但周期性较长进展缓慢。随着 基因工程和生物技术的发展，通过转基因的方式导入抗逆的目的基因从而改良作物品种， 越来越多的受到人们的广泛重视。 烟酰胺合酶基因(^MS)是一种植物生长代谢中的关键酶基因，现已证实在植物铁离 子吸收中具有重要作用。它催化合成的产物烟酰胺(M)，不仅是植物铁载体的合成前体， 而且参与植物体内铁离子的转运、分配和贮存的活动，后来发现由于它对其他一些重金属 离子也能起到转运的功效，因而显示出较强的重金属耐逆作用，表现出一定的植物修复功 能。 本实验采用农杆菌介导的油菜下胚轴转化方法，将水稻中的盐胁迫诱导基因(删SJ) 转入甘蓝型油菜品种扬油6号中，主要实验结果如下： 对油菜下胚轴的遗传转化体系进行了探索和优化处理。最终建立了油菜下胚轴高效遗传转 化体系：即选取在MS培养基上生长4天的幼苗，切取其下胚轴并置于预培养基(MS+ 1．0mg／L2,4一D+1．0mg／L 2，4·D+1．0 杆菌侵染25min，置于共培养基(MS+0．1ing／Lmg／L6-BA+5．0mg／LAgN03， 2，4一D+1．0 pH，5．8)上培养3天，之后将外植体转入分化筛选培养基(MS+O．1mg／Lmg／L 6-BA+5．0mg／LAgN03+10mg／LKarl+500rng／LCef,pH，5．8)中进行分化筛选培养，以 形成绿色幼苗。 2．将筛选得到的较大幼苗，移入生根培养基(MS+0．3 Kan+500 mg／LNAA+10mg／L mg／L MS)中壮苗。对 Cef,pH，5．8)上生长，至其长出根后，将其移入壮苗培养基(1／2 获得的幼苗进行PCR分子鉴定，最终筛选得到转基因阳性植株50棵，其中18棵移栽入土 壤中，开化后自交后收获种子。将收获的To代种子与扬油6号亲本进行对比，发现其种子 发育不良，表现出种子干瘪和籽粒较小，但其萌发后生长势要优于对照扬油6号。对T0 代转基因种子进行盐胁迫下萌发指标的测定，结果发现转基因种子耐受盐碱胁迫的能力的 确在一定程度上强于对照。 3．将Tl代转基因幼苗用20mM的碳酸钠处理，9天后观察其生理变化，并测定其CAT 和POD的酶活变化，以及根系活力。结果表明，T1代各株系的CAT酶活性均高于扬油6 系之间并无显著差异，甚至出现一些株系中POD酶活力低于对照的现象。在根系活力实 验中可发现，盐碱胁迫下，转基因T1代各株系的根系活力均强于对照扬油6号。 关键词：甘蓝型油菜，烟酰胺合酶基因，农杆菌，转基因，盐胁迫，生理指标 andalkali Effectonsalt stressin Brassica transgenienapus ●-l ● ·● ● ‘ Withnicotianamine synthasegene ABSTRACT isoneoftheworld’Sfour oil thefeatureof Rapeseed majorcrops，with and ec