旋毛虫分子分类与49ku结构基因在昆虫细胞中表达的研究.pdf

摘要 18S 生物体内含量较大占80％左右，且在进化过程中非常保守，核苷酸的替换率较低，因而 它是揉讨生物高级分类群系统演化的难得工具之一。本实验克隆并比较了旋毛虫5个隔 离种的18srRNA基因序列，分析他们的同源性，为旋毛虫的分类和诊断开辟了新的途 径。旋毛虫排泄分泌(Excretory-Secretory 合Trizol RT-PCR扩增目的基因18S 送有关生物公司测序，同时在哈尔滨兽医研究所生物技术重点实验室也进行测序。用 DNAstar和Genedoc软件分析结果显示，18S rRNA基因的种间同源性很高，均在99％ 以上。猪旋毛虫与旋毛形线虫的同源性为99．4％，犬旋毛虫与本地毛形线虫的同源性为 99．3％，猫旋毛虫与旋毛形线虫比与本地毛形线虫的同源性要略高O．4％。因此，猪旋毛 虫与旋毛形线虫，犬旋毛虫与本地毛形线虫的亲缘关系更近，这与传统分类学的结果相 符台。本地毛形线虫和猪旋毛虫的18S 扩增本地毛形线虫49ku ES结构基因，酶切后与供体质粒连接，在大肠杆菌中克隆，将 克隆有外源基因的供体质粒转化DHl0Bac感受态细胞，该细胞含有杆状病毒穿梭载体， 供体质粒中的外源基因在辅助质粒编码的转座酶作用下，通过转座而插入杆状病毒基因 blot检测， 可以被小鼠旋毛虫的阳性血清识别。实验结果袭明，旋毛虫的Es抗原在诊断和免疫方 面具有很好的应用前景。 8S 关键词旋毛虫；1 rRNA基因：49kuES结构基因；序列分析：轩状病毒表达 V TheStudiesonTrichinella spp．Molecular and of49kuStructuralProteinGenefor Expression Cells Insect Abs仃act 18SrfⅢA sinailsubunitribosomalRNAand1 S0％in gene．encoded 800bp．was aS of and conservedmoleculesinCOUrseevolution．so18SrRNA organismregardedhighly wasthe markerfor and evolution．Inthis important taxonomy gene organism system study,we clonedand 18SrRNA offive is mchinellaisolates．Theresult allalyzed genesequences in and thedifferentTriehinellaisolates．TheES of meaningfulidentifying protein classifying Trichinel