水稻抗白叶枯病基因Xa30对应病原菌无毒基因.pdf

捅晏 由革兰氏阴性菌引起的水稻白叶枯病(Xanthomonasoryzae 严重的细菌性病害，在世界产稻国均有报道。白叶枯病菌寄主特异性强，且与水稻之间为典型的 基因对基因互作关系，是分子植物病理学中研究植物与病原物互作的重要模式系统之一。根据基 因对基因学说，植物抗病性常常是由来源于植物的抗病基因与相应的来源于病原物的无毒基因互 作所决定的，无毒基因决定了病原菌对含有相应抗性基因的寄主植物发生特异性不亲和反应。明 确Xoo致病性的分子机理对于揭示Xoo与水稻的互作机制以及制定病害防治策略具有重要的科 学意义。 国际鉴别菌株PX099A的基因组序列已经公布，这为我们研究水稻白叶枯病菌与水稻的相互作用 提供了良好的生物信息资源，但仍然不能够解释大批未知功能基因。Xoo突变体库的建立是开展 病原菌功能基因组学研究的有效途径。本实验室前期利用Tn5转座系统构建了国际鉴别小种 99％，覆盖PX099基因组6倍。 本实验室从我国普通野生稻中发掘、鉴定了一个编号为Y238的新抗源，经遗传分析证明其 已将其定位在水稻第11号染色体长臂上。国际鉴别小种PX099是一个毒性很强的菌株，具有广 谱致病性，大多数水稻品种对其表现感病，而CBB30I对其表现抗病。为了研究抗病基因Xa30 对应CBB30I的无毒基因。主要研究结果如下： 个使CBB30I植株感病的突变体菌。 2．突变体菌复筛鉴定：将获得的210个突变体菌在CBB30I上进一步接种，同时以感病品种 m24为对照，最终确认23个突变体菌能使CBB30I水稻品种产生不同程度的致病症状。 3．分子检测Tn5插入：采用PCR和Southern 转座子插入检测，结果表明使CBB30I抗性发生改变的突变体菌株均为转座子插入引起，只有一 个突变体菌为双拷贝插入，其它均为单拷贝插入。 4．Tn5插入位点左右边界基因组序列获得：利用PCRwalking方法，包括基因组酶切、加 入接头、二轮PCR等技术，共获得9个致病突变体菌Tn5插入位点左右边界基冈组片段。 5．生物信息学分析： 将9个致病突变体菌左右边界的侧翼片段进行测序。测序后经Blast protein)， effector 其下游有一基因talC6a，编码蛋白为TAL AvrBs3／pthA，与该基冈配对的抗病基因目前还 别编码LysR家族中的转录调节蛋白(transcriptionalregulator,LysR withHD．GYP systemregulatoryprotein Tn5插入破坏的基因编码产物分别为青霉素酰基转移酶II(penicillinacylaseⅡ)、马来酰乙酰乙 测由于Th．5插入阻断蛋白活性，使突变体菌株表现出对水稻品种CBB30I的致病性从无毒转变为 有毒。 关键词：水稻、白叶枯病菌、PCR walking、致病突变体、无毒基因 Abstract bacteriumXanthomonas most oryzae oneofthe important Gram-negative pv．oryzae(Xoo)is ofrice．has inthe rice intheworld．皿einteraction pathogenicitiesspreadedmajorgrowingregions betweenXooandriceisfollowedthe isconsideredasamodel gene-for-genehypothesis．Xoo pathogen intheresearchofmolecular to