大鼠肾移植慢性排斥模型中外周血清间α胰蛋白酶抑制剂水平的意义探讨.pdf

型燮 ／煳炒 大鼠肾移植慢性排斥模型中外周血清间E1胰 蛋白酶抑制剂水平的意义探讨 硕士研究生：张建强 指导教师：赵明教授 摘要 背景与目的 随着医学技术的不断进步，在器官移植领域，组织配型技术取得跨越式的 发展及新型免疫抑制剂在临床中的应用，肾移植术已成为临床治疗终末期肾病 的主要方法，且人／肾存活率得到逐年升高，术后早期急性排斥反应发生率明显 下降，移植肾短期存活率得到显著提高，但移植肾长期存活仍未得到明显改善， 这其中包含免疫因素和非免疫因素的作用，其中在免疫因素中慢性排斥反应是 其影响移植肾长期存活率的主要因素，慢性排斥反应仍然是一个长期困扰移植 界的难题，供肾与受者达到完全耐受仍然是一个理想的目标。到目前为止，移 植肾病理活检仍是目前能明确诊断慢性排斥反应的金标准，但鉴于其为有创操 作，有导致不同并发症的风险，同时由于移植肾活检标本存在误差，或缺乏程 序性肾活检的资料，供肾移植前存在组织学损伤和CsA或FK506肾毒性与慢性排 斥难以区别，使慢性排斥反应的诊断更复杂，诊断需要3．5天的时间。因此探讨 一种敏感特异的非侵袭性检查方法和客观指标，对于诊断和预测慢性排斥反应 及其转归，及早干预病情的发展，制定个体化免疫抑制方案均具有重要意义。 间。胰蛋白酶抑制剂，inter-alpha-trypsininhibitors(简写成ITI)，是一系列蛋 白水解酶抑制剂的统称，血浆中含量较高，ITI在炎症、创伤修复、肿瘤转移等 免疫活动中发挥着重要作用。在脓毒症、坏死性结肠炎等患者血浆中ITI的含量 较正常人明显下降，且下降幅度与病死率相关。而移植肾慢性排斥反应无论是 摘要 从组织形态学还是细胞因子角度分析，均存在炎性细胞浸润、炎症因子的释放， 在慢性排斥反应中免疫应答占据非常重要的位置，大量文献证实ITI可以用于预 测体内免疫活动强弱的功能，临床或动物实验中，已成为脓毒症、溃疡性结肠 炎、肿瘤等疾病的一个重要的预测及预后的指标，也有大量事实证明其用于治 疗疾病上，鉴于ITI能预测体内免疫反应强弱的特性，我们通过检测慢性排斥反 应大鼠血浆中ITI的水平，与正常肾移植组大鼠相比较，来初步探讨ITI在大鼠慢 性排斥反应中所起的作用。 动态表达情况，并与移植肾病理检查相比照，就ITI对移植肾慢性排斥反应是否 有预测作用展开初步探讨和研究。 方法 l、SD．Wistar大鼠肾移植模型的建立 进行一定时间的预实验，以熟悉显微外科技术及能建立稳定的肾移植模型， 正式实验阶段分别选用SD大鼠和Wistar大鼠作为供体和受体，采用显微外科手 术技术行SD．Wistar左肾原位肾移植术。麻醉后分离供体左肾动脉、静脉、部分 腹主动脉及输尿管，切取供肾前用4。C乳酸林格氏液(含肝素25U／m1)通过腹主动 脉原位灌注供肾至呈均匀土黄色，肾静脉流出液清亮，切取供肾并置于4。C乳酸 林格氏液无菌保存。再离断受体左肾动脉、静脉及输尿管后切除左肾，供、受 体左肾动脉、肾静脉及输尿管分别行端端吻合。鐾馇查暨丕翊除，完整保留作 一、--—～—，_-—，_————一 为每个移植肾样本的内参照。慢性排斥反应组受体于术前3天起，即给予腹腔 注射环孢素A微乳化剂2mg／kg，每日1次，以抑制急性排斥反应，而正常肾移 植组则给予环孢素A微乳化剂腹腔注射5mg／kg，每日1次。手术后当天一次性 肌注青霉素50mg／kg预防感染。并随机选取两组大鼠(各10只)在术后当天取 血标本检测CsA浓度谷值。 2、大鼠肾移植慢性捧斥反应组织病理及Treg细胞检测 U 硕士学位论文 保留受体自身右肾作为每一个移植肾的内对照。所有受体均于术后当天一次性 肌肉青霉素50mg／kg预防感染。受者60只，存活57只(此数量包含术前大鼠，非实 验设计死亡的大鼠均依据实验要求再补充至60只)，取肾移植存活受体以及术前 大鼠共60只进行随机实验分组，分成正常肾移植组(对照组，n=30)、慢性排 注射)治疗，以抑制急性排斥反