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DNA和凝血酶荧光分析新方法的研究 崔晓霞 摘要核酸是生命的遗传物质，蛋白质是生命的体现者。人类许多遗传疾病 与DNA碱基序列的变异有关，人体中特定蛋白质浓度也可以作为疾病诊断的依据， 因此，建立高灵敏度、高选择性、简单、快速检测特定序列DNA和蛋白质的分析 方法，对疾病诊断和预防具有重要的意义。荧光分析方法因其高灵敏度、高选择 性、简单、快速等优点，已在生命分析中得到广泛的应用。 本论文由综述和研究报告两部分组成。第一部分介绍了荧光分析方法的原理 及特点，简要评述了DNA、蛋白质检测方法的研究进展。以荧光纳米粒子为重点 介绍了常见的荧光标记物，最后阐述了本论文的研究目的和内容。 第二部分为研究报告，由两部分组成。第一部分以异硫氰酸罗丹明B嵌合二 氧化硅纳米粒子为荧光信号物质构建纳米荧光核酸探针，使其与固定在磁性纳米 粒子上的目标单链DNA杂交，经磁场分离后测量沉淀物的荧光强度。实验结果表 明，该荧光强度与目标单链DNA的浓度在1．3x10-14～2．5×10。13mol／L范围内呈线 性关系，线性方程为／40．1C+10．1(C的单位为1013mol／L)，相关系数为O．9968。 方法的检出限为1．6x10”mol／L。本研究结合纳米技术及生物磁场分离技术通过磁 性材料标记生物分子实现了磁性分离，结合分子识别技术，通过磁性材料标记生 物分子实现了磁性分离，提高了分离的选择性。建立了一种高灵敏的DNA杂交荧 光检测方法，对DNA分析方法的研究具有一定的参考价值。 研究报告的第二部分提出了基于竞争反应的非标记荧光蛋白质检测方法。以 凝血酶为检测对象，使用能够专一结合凝血酶的核酸适体作为识别分子，设计了 含AP位点的适体的互补DNA，建立了高选择性荧光检测凝血酶的新方法。没有 凝血酶时，核酸适体可以和内含AP位点单链DNA最大程度地杂交形成双链DNA， 荧光分子氨氯吡咪嵌合在双链DNA中的AP位点处并与AP位点对面碱基T结合， 使得氨氯吡咪的荧光信号下降；当凝血酶存在时，凝血酶竞争结合其适体，释放 出双链中嵌在碱基缺失位点(APsite)的荧光报告分子氨氯吡咪，荧光信号增强， 并且荧光强度的增强程度与凝血酶浓度呈线性关系。掘此，可基于荧光强度的增 强来对凝血酶进行定量测定。在选定实验条件下，检测凝血酶的线性范围为 mol／L。实验结果表明，利用凝血酶与其核酸适体的互补 方法的检出限为1．3x104 链的竞争作用，释放出嵌在双链DNA中AP位点的荧光分子的原理可建立高选择 性、均相、非标记检测凝血酶的分析方法。该方法的建立为基于含核酸适体和AP 位点双链DNA非标记测定蛋白质提供了一条新思路。 关键词：荧光； 纳米粒子； 核酸适体；DNA；凝血酶； H FluorescenceMethods Analytical fortheDetectionofDNAandThrombin Cui Xiaoxia Abstract acidisan material．Thebase Deoxyribonucleicimportanthereditary ofDNAis relatedto diseases．Proteinisoneofthe variation tightly genetic important of of inthehuman leadto partsorganism．Thequantitychangesprotein bodymay itis todetectDNA and pathological important sequencepro