利用高蛋白解脂罗维亚酵母转化菊粉生产单细胞蛋白的研究.pdf

利用高蛋白解脂亚罗维亚酵母转化菊粉生产单细胞蛋白的 研究 ? ●●___一 ： 于两要 近年来，用于食品和饲料的蛋白质需求量正在不断增加。单细胞蛋白生产 技术为解决全球蛋白质短缺的问题提供了一条可行之路。单细胞蛋白的生产作为 一个生物转化过程，将低成本的的原材料转变成了拥有高营养价值和市场价值的 产品。而选择廉价的原料对于控制单细胞的蛋白生产的成本至关重要。菊粉作为 植物的一种贮存性多糖，主要存在于如菊芋、菊苣、大丽花和雪莲果等植物的根 茎中。作为一种可再生，廉价和来源丰富的原材料，菊粉资源得到越来越多的重 视。这些优势使菊粉和含菊粉的植物成为SCP工业化生产的优质原材料。 marxianusCBS 从酵母Kluyveromyces 6556中克隆的肌厂，基因连接到了分 SWJ．1b．中 lipolytica 泌型表达质粒plNAl317，并且在高蛋白海洋酵母Yarrowia SWJ．1b，能够商接利用菊粉生 得到表达。使原本不能分泌菊粉酶的Y．1ipolytica 4-0．9 产单细胞蛋白。细胞生长80h后，重组菌株分泌的菊粉酶酶活达到了．43．1 U／ml。采用单次因子方法优化了产单细胞蛋白的最适培养基和最适条件，得到最 0．1％，初始 适培养基组分为(w／v)：菊粉4％，豆饼粉水解液4％，fNH4)2S04 rpm振荡培养88h。在以上条件下培 pH为6。最佳培养条件为，在28℃和180 养，细胞干重达到19．5朗，蛋白含量为38．7％(w／w)，总蛋白量为7．54鲋。当该工 程酵母菌在含有4．0％的菊粉(w／v)培养基中通过2一l发酵罐发酵72h后，细胞的 粗蛋白含量、细胞干重、还原糖含量和总糖的利用率分别达到47．5％(w／w)、20．1 ∥l、0．6 通过过2一l发酵罐发酵80h后，细胞的粗蛋白含量、细胞干重、还原糖和总糖的 4-0．2 利用率分别达到53．7％(w／w)、20．8朗、1．3g／1和94．2％(w／w)。所以，Z lipolytica的重组菌株能够很好的利用菊粉以及含有菊粉的作物生产单细胞蛋白。 使用Ni亲和层析法纯化了重组菊粉酶。SDS．PAGE结果表明纯化的重组菊粉 oC，50 酶的分子量约为84kDa。纯化的重组菊粉酶最适作用温度为50 oC以下具 5．0—9．5之间有良好的稳定性；Na+ 有良好的稳定性；最适作用pH为4．5，在pH 有抑制作用，其中A矿和H孑+表现出较强的抑制作用；蛋白抑制剂sDs对其酶活 粉酶能够将菊粉分解成单糖和部分寡糖，具有外切酶活性。 o 关键词：真核表达；单细胞蛋白；菊粉；菊粉酶；解脂亚罗维亚酵母；海洋酵母 f Direct ofinulininto conversion cell the protein