北极地区表层海中石油烃降解微生物及其降解基因多样性的研究.pdf

摘要 摘要 随着全球气候变暖加速北极海冰的融化，人们在北极地区的科考、航运和石 油勘探开采活动日趋频繁，从而导致石油烃逐渐成为北极环境污染的重要因素之 一。但是，由于北极地区独特的环境及气候特征，北极地区海洋生态系统对石油 烃污染的自我净化能力相比于其它大洋而言更为脆弱。因此，了解北极地区海洋 中石油烃降解菌的多样性及其降解特性，对北极地区石油烃污染的治理具有重要 的理论价值和现实意义。 本文以中国第四次北极科学考察期间在白令海及北冰洋获取的15个表层海 水样品(从北纬520到88．50)为实验材料，以混合碳源【原油：柴油=1：l(v／v)， 内含萘、菲、芘三种PAHs，它们在培养基中的终浓度分别为200mg／L、100mg／L 和50 mg／L】为碳源，采用4℃低温富集(4℃和15℃条件下，M2培养基平板分 离)和25℃常温富集(25℃条件下，M2培养基平板和BH石油熏蒸平板)的 方法研究了这15个样品中可培养石油烃降解菌的结构组成。最终经富集培养和 单菌分离鉴定，共获得219株可培养单菌，结果描述如下：4℃富集菌群在4℃ 可培养菌株总数的86％。4℃富集菌群在15℃条件下分离的单菌，归属于y和a 变形菌门9个属中的15个种，其中】，变形菌门的细菌为优势类群，占总数的74％， Glaciecola 3 个属。25℃富集菌群中分离的单菌，分属于5个13／亚门的25个属的46个种， Actinobacteria，其中’，和a变形菌门的细菌为优势类群，分别占可培养单菌总数 25℃可培养单菌总数的8％和7％。25℃富集菌群中利用BH石油熏蒸平板分 离获得的单菌，归属于5门／亚门的19个属中的25个种，这5个门／亚门为卜a．、 摘要 分别占可培养单菌总数的54．8％和33．3％。】，变形菌门包含7个属中的12个种， 属。 获得单菌纯培养后，本文还对单菌进行了碳源降解能力验证，结果表明4℃ 富集菌群中在4℃条件下分离获得的菌株对混合碳源有较好的降解效果，特别是 效果；在15℃条件下分离获得的单菌整体上而言对混合碳源的降解能力较差， 集菌群中由M2平板分离，对混合碳源有较好降解效果的菌株主要属于 未表现出很好的降解能力，甚至有部分菌株对混合碳源无降解能力。随后，对部 分25℃分离培养的单菌进行单碳源降解能力验证，结果表明菌株R6．15 (Thalassolituusoleivorans)、BN10-2(Marinobacter BNl0．16(Dietzia Pseudoalteromonas属对本实验所用的单一碳源都不具有降解能力。通过简并引 物对混合碳源有较好降解效果的单菌，进行alkB和PAHs降解起始双加氧酶大 亚基基因片段的扩增结果表明，仅从15株单菌中获得了15个alkB基因片段， ℃和25℃可培养单菌中均为优势菌株，并且部分菌株对混合碳源具有很好的降 解效果，但是利用现有的兼并引物均未扩增到alkB基因和PAHs降解起始双加 氧酶基因。 总之，本文首次在大地理尺度上(从北纬520到88．50)研究了北极地区表层 海水中石油烃降解菌的种群及基因多样性，研究结果将为低温海洋环境中石油烃 污染的治理提供必要的菌株资源，为低温条件下石油烃降解机制的研究提供宝贵 Ⅱ 摘要 的实验材料。 关键词：北极表层海水；海洋石油污染；石油降解菌；降解基因 Ⅲ Abstract Abstraet ice wasaccelerateddueto SincetheArcticsea melting globalwarming,the hasbeenoneofthe factorsintheArct