抗蚜虫PPA基的小麦转化.pdf

摘要 摘 要 近年来植物转基因技术研究发展迅速，大豆和棉花等转基因作物已大面积推广 应用，取得了巨大的经济与社会效益。小麦是世界主要的粮食作物，1992年第一株 转基因小麦诞生，为开展小麦分子育种奠定了基础。本课题针对目前小麦转基因中 存在的低转化率、栽培品种少、抗虫基因单一等问题，拟利用掌叶半夏凝集素(Pinellia pedatiSecta + 的转化体系。 j 本文选用了“石4185”、“扬麦12”等7个小麦品种，研究了品种、激素等条 件对小麦愈伤组织诱导及分化的影响，并通过检测GUS基因的瞬时表达情况，研究 了基因枪介导法的主要参数对转化效率的影响。将含有抗蚜虫基因(PPA基因)和GUS 报告基因的质粒载体导入小麦愈伤组织，在含潮霉素的选择培养基上进行筛选、分 化及壮苗，获得了抗性植株。 实验结果表明，最适的转化受体是幼胚诱导的胚性愈伤组织，轰击前6小时及 轰击后18小时将愈伤组织置于含甘露醇0．4mo卜L’1的高渗培养基上进行高渗处理有 助于提高转化率，当轰击压力为1100 psi；质粒1“∥枪及金粉300 p∥枪时，GUS 瞬时表达率及表达量最高。将已轰击愈伤组织在含2m分Ld的2，4．D的恢复培养基上 恢复培养5天至7天能有效提高愈伤组织的植株再生能力。用60mg．L．1的潮霉素筛 选30天后可以获得抗性愈伤组织，经过检测抗性愈伤组织中GUS基因稳定表达。 在KT浓度为l mg·L．1且NAA浓度为O．1m舻L叫至O．5mg·L以的分化培养基中分化 出绿色芽点，并诱导成苗。 关键词小麦；蚜虫；愈伤组织；基因枪法；潮霉素筛选：PPA Abstract 】nrecent world、Vitnessedthe yearS，t}le of rapiddeveJopmentp】ant modj6ed cultivars疗om techIlology．Genetically andcottonhavebeen soybean widelv eno册ous economicaIldsocial 伊oWn锄dproVided benefitS．Wheatis011e oft11e major food f．ortlle、vo订d’s firSt crops of、^jrheat population．The report trallsgeIlic 992， pl卸tS击1 asolidfoulldationform01ecular pr0Vides