武夷山自然保护大型真菌土壤粘细菌多样性及其次级代谢产物的研究.pdf

摘要 摘要 微生物是活性天然产物的重要来源。本论文研究以武夷山自然保护区大型 真菌和土壤粘细菌为对象，分两篇分别探讨武夷山自然保护区大型真菌的生物 多样性和分离l株大型真菌发酵产物的13个新二萜化学成分；通过LC．HIWS分 析、化合物数据库检索、基因组分析和PCR筛选等多种手段，探索粘球菌的化 学分类及其新次级代谢产物的定向分离，发掘产生埃博霉素的新粘细菌资源和 LC．HfUⅥS追踪分离新PKSNI冲S生物合成基因簇的产物，为深入开发武夷山自 然保护区大型真菌和土壤粘细菌的新活性天然产物提供了丰富的菌种资源和可 行的研究模式。 第一篇为武夷山自然保护区大型真菌的生物多样性以及可培养大型真菌辐 毛鬼伞Cop，．切淞m赢聊M65菌株发酵产物的化学成分研究。武夷山自然保护区 地处亚热带，是中国东南亚大陆生物多样性最丰富的地区，具有全球生物多样 性保护意义。本研究从2006年7月一2008年7月先后五次对武夷山保护区部分区 域的大型真菌进行采集，共获得300多份子实体，形态鉴定子实体标本178份， 个来自NCBI的参考序列进行系统发育和多样性分析，结果表明17个进化支共包 果表明武夷山保护区蕴含着十分丰富的高等真菌资源。此外，本论文研究对分 离自大型真菌的辐毛鬼伞C(矿f胛螂M砒珊M65菌株的发酵产物，开展了系统的 A．-M。其中 分离纯化和结构测定，发现13个新二萜化合物Radianspenes M为首个P卜l(aurane型二萜 Radi锄speneC显示良好的细胞毒活性，I湖iaIlspene 之外的新颖二萜二聚体。 第二篇为粘细菌次级代谢产物的研究和PKSNI冲S基因簇c94l的产物的初 探。从全国各地采集土样和腐烂植物分离得到的239株粘细菌菌株进行纯化，得 到约157株纯培养粘细菌，通过形态鉴定和16SrDNA测序比对相结合，最终鉴 定粘球菌6l株，珊瑚菌6株，堆囊菌90株。 关于粘细菌的新活性天然产物的系统发掘，首先采用HPLC．HRMS筛选的 方法，联合德国萨尔大学的粘细菌已知化合物数据库，对61株粘球菌 l 摘要 m)，)【ochromid可能有种级化学分类学意义，DKX 化学分类学意义；发现叶柄粘球菌肱s砌妇f螂SBMxl32菌株能产生少量的DK． x MxUA。通过LC．HRMs示踪对其进行分离纯化，共分离得到7个单体化合物， 确定为新聚酰胺类化合物。其次，重点对85株堆囊菌的粗提物进行活性筛选， 并结合LC—HI洲S分析和数据库检索，最后得到7株可能产生新结构活性化合物 的候选菌株；使用PCR筛选，结合代谢产物的LC—MS分析，从60株纤维堆囊菌 中发现l株埃博霉素相对高产的菌株xMU．So．112。最后，本论文研究通过对黄 色粘球菌坳∞∞淞翮胁鲫A47菌株基因组的生物信息学分析，以一个新 PKSNI冲S生物合成基因簇c94．1为研究对象，通过单交换同源重组，得到突变 株47一c94om一和47．c94 orf2一和加强表达突变株A47．缸15；比较3株突变株以及 野生型菌株的次级代谢产物，发现化合物777(双电荷离子，，以777．92)可能为 基因簇c94 1的生物合成产物，这个结论得到该化合物的二级质谱的分析结果的 验证和支持。 A_M；粘细菌；天然产物；生物合成 关键词：武夷山；大型真菌；radianspenes II nove· 哪慨te面?I!：翼三：罴霉菱嚣：=蒿：：：盂他en 紫唑舶：：竺=篇篓=：i淼一孤她 寥篡竺黧：三=：：：l=竺箸：蒿=三=锄d忘 ana篡呼¨：：三!篡：：：=：二三署=：ana’恤∽． 唧b?洒三。跫二：，篡：：：=1：：葛=岩磊I二P硒心船s