毒死蜱降解菌的离、鉴定及其降解特性.pdfVIP

摘要 有机磷农药是目前世界上使用量最大的杀虫剂之一，其在农业生产上的广泛应用在提高作物 产量的同时也给环境带来了严重的污染，已对人类健康构成威胁。国内外在毒死蜱农药的微生物 降解方面进行了一系列研究，主要集中在菌株的分离、鉴定和降解性能研究方面，部分菌株降解 效率较低，还需继续扩大降解菌菌种资源，筛选出高效的降解菌株。 本研究采用富集驯化方法分离到三株毒死蜱降解菌，它们能够利用毒死蜱作为唯一碳源进行 生物降解；优化了毒死蜱降解菌的生长条件，检测了其降解能力和毒死蜱代谢产物，并对菌株内 的毒死蜱降解基因进行了定位和克隆。主要研究内容如下： l从农药厂污水曝气池的活性污泥中，筛选到三株能够降解毒死蜱的细菌，分别命名为：CPl、 CP6和CP7。通过形态学观察、16S rDNA序列分析等方法，菌株CPI鉴定为人苍白杆菌 (Ochrobactrum anthropO。菌CP6为假单胞茵属(Pseudomonassp．)，菌株CP7为伯克霍尔德氏菌属 (Burkholderiasp．)。其1 144 和肫80145。 CPl菌株降解毒死蜱的主要因素进行优化分析，得到菌株CPl对毒死蜱的最适降解条件为：农药 浓度100 提高到75．18％。毒死蜱降解优化试验提高了CPl菌株对毒死蜱的生物降解性能。 3运用色谱法和质谱法检测了菌株CPl降解毒死蜱的代谢产物，结果发现，菌株CPl对毒 死蜱的代谢产物不同于通常的三氯吡啶酚，而是一种新的物质，推测该物质是由毒死蜱结构中P．S 的断裂而产生。这说明，CPI菌株中含有的毒死蜱降解酶不同于已知的有机磷降解酶，从而可以 推测菌株CPI中含有特异性的毒死蜱降解基因。 4用质粒扩增的方式检测野生型CPI菌株中是否含有质粒，根据其结果推测毒死蜱降解基因 可能会位子菌株的染色体上。提取细菌基因组，根据已知的有机磷降解酶基因设计特异性引物， 利用梯度PCR从基因组中扩增有机磷降解酶基因，结果显示没有得到预期的基因，利用 CPl菌株中降解毒死蜱的酶是组成型酶。 关键词：毒死蜱，生物降解，响应面法。条件优化，代谢产物 Abstract is the oneofthemost usedinsecticidesin world．Itcouldcontaminate Organophosphoruswidely theenvironmentandharmthehealthofhumanwhile the were studies improvecropyield．Theremany conductedonthemicrobialremediationof mostofthemfocusedonthe chlorpyrifos，and isolation， abilitiesof strains．Butthe efficiationof degradative characterization,degradingpesticide-degrading is it to the some is resourceof bacterium． lower,SO ofmicroorganismsnecessaryexpand biodegradative Inthis isolatedthree bacterialstrains and