盐胁迫下拟南芥烯合成突变体生理生化表型.pdfVIP

摘 要 植物激素乙烯调节各种植物生长发育和胁迫反应过程。但是有关盐胁迫条件下乙烯 生物合成及信号转导途径尚需深入探讨。 乙烯合成酶(ACC synthase, ACS)基因家族中共有12 个基因，本论文选取其中一个基 因，命名为AtESTH (Arabidopsis thaliana gene for Ethylene Synthesis factor) ，研究其在 NaCl 胁迫下的生理表型及相关分子机制。萌发和根生长实验表明，与野生型(wild type,WT)相比，Atesth 幼苗对NaCl 具有一定的抗性，表现在：150mM NaCl 处理条件下， WT 萌发率约为7% ，而Atesth 萌发率为15%，其萌发率是WT 的2 倍多；在150mM NaCl 处理条件下生长10 天的幼苗，WT 平均主根根长平均为0.35 (±0.06) cm，Atesth 根长为 0.95 (± 0.03) cm，后者是前者的3 倍左右。半定量实验结果显示，在150mM NaCl 处理 下，AtESTH 表达量与control 相比明显上升，证明在转录水平上AtESTH 参与拟南芥对 NaCl 胁迫应答。 + H -ATP 酶活性对维持植物细胞内的离子平衡具有重要意义。实验结果显示，在对 + 照条件下，WT 和Atesth 植株的H -ATP 酶活性相差不大；150mM NaCl 处理72 小时后， + Atesth 突变体中该酶活性明显上升，说明H -ATP 酶活性变化参与AtESTH 对NaCl 胁迫 调节。150mM NaCl 处理后，激光共聚焦扫描结果显示，WT 中H+探针的荧光强度提高 + 了11%，Atesth 中荧光强度提高了33% 。这说明盐胁迫下AtESTH 通过对H -ATP 酶活 性调节，影响了拟南芥对NaCl 胁迫的抗性。 正常情况下，植物细胞内维持一定水平的活性氧(Reactive oxygen species ，ROS) ， 但在胁迫条件下，植物细胞内ROS 水平会迅速上升，过量的ROS 会对细胞造成伤害。 DAB 染色结果显示，150mM NaCl 处理4 小时后，WT 和Atesth 的根部着色都变深，但 是Atesth 比WT 处理前和处理后染色要浅；同时通过激光共聚焦实验，发现WT 和Atesth 在150 mM NaCl 处理前后，ROS 水平WT 植株有明显上升，约为处理前的4 倍；而Atesth 根部的荧光强度变化不明显；测定CAT 活性发现，NaCl 处理后，WT 幼苗体内CAT 活 性提高了51%，Atesth 幼苗体内CAT 活性提高了114%，这说明ROS 代谢可能参与了 AtESTH 对盐胁迫应答。 I 利用Ca2+探针和激光共聚焦技术监视突变体中胞质自由Ca2+浓度变化，实验结果显 示，野生型的Ca2+增加70% ，而突变体为100%，同时它们都会在较短的时间内升高， 2+ + 突变体相对应WT 上升快。说明AtESTH 可以促使细胞释放Ca 而减少Na 吸收，以此 应对盐胁迫。 + 2+ 综上所述，AtESTH 通过对细胞内 ROS 、 H 和 Ca 浓度的调节影响拟南芥对盐胁 迫的应答，来提高植物对盐的适应性。 关键字：ROS ，盐胁迫，乙烯，ACS II ABSTRACT Ethylene plays an important role in plant growth and development and in responses to variou