直翅目昆虫Ub和Wg基因的克隆与高级阶元系统发育关系.pdfVIP

摘 要 摘 要 直翅目 （Orthoptera ）隶属于昆虫纲（insecta ）有翅亚纲（Pterygota ）新翅下纲 （Neoptera ），包括蝗虫、蚱、蜢、螽斯、蟋蟀、蝼蛄等，全球已知 25,000 余种，中国 已记录约2,360 种。直翅目高级阶元的系统发育关系至今尚未定论，为大多数学者所接 受的2 亚目分类系统也受到来自分子数据的质疑。 本论文基于2 个发育调控基因（Ubx 和 Wg）序列对直翅目高级阶元的系统发育关 系进行了分析。应用PCR 、RT-PCR 和巣式PCR 的方法，分别得到3 种昆虫 Ubx 基因 117bp 和9 种昆虫 Wg 基因549bp （gap 包括在内）的核苷酸序列。利用MEGA 软件对 序列进行碱基组成、替换分析，遗传距离等。同时从GenBank 下载昆虫纲以及外群甲壳 动物大型溞的相关基因序列，使用MEGA 、PHYLIP 、MrBayes 和PAUP 软件分别构建 基于Ubx 和 Wg 基因的系统发育树，结论如下： 1、Ubx 基因117bp 的核苷酸序列高度保守。直翅目中变异位点数13 个，占11.1%，全 部发生在密码子的第3 位点，均为同义突变，没有造成氨基酸序列的差异。碱基组成表 现出明显的不均衡性，在直翅目类群中，密码子第3 位点的G+C 含量高达92.9%，但是 密码子第2 位的G+C 含量却仅为 33.4% 。氨基酸组成上，不含天冬氨酸（Asp ）、甘氨 酸（Gly ）、脯氨酸（Pro ）、丝氨酸（Ser）、缬氨酸（Val ）和酪氨酸（Tyr ），碱性氨基酸 精氨酸（Arg ）的含量最高，为17.95%。 2 、Wg 基因包括Gap 在内的549bp 的核苷酸序列保守位点数为375，占68.3%，密码子 第3 位的变异率最高，为56.3%，第2 位点变异率为18.0%。碱基组成表现出明显的不 均衡性，在直翅目类群中，密码子第 3 位点的 G+C 含量高达 96.8%，但是密码子第2 位的A+T 含量却为52.9% 。氨基酸组成上，12 种直翅目昆虫涵盖20 种氨基酸中，色氨 酸（Trp ）的含量最低，平均含量为0.56%，其次是异亮氨酸（Ile ），平均含量为1.91%。 碱性氨基酸精氨酸（Arg ）的含量最高，为11.26%，甘氨酸（Gly）的含量次之，为11.12%。 3、碱基替换饱和度分析显示，Ubx 和 Wg 基因转换和颠换均为达到饱和。遗传距离分 析均表现出直翅目类群间的遗传距离较小，而与外群的遗传距离较大。 4 、系统发育重建结果显示，基于Ubx 基因部分序列构建的NJ 树、MP 树、ML 树以及 贝叶斯树都没有很好的解决直翅目的系统发育关系问题，这可能与Ubx 基因这段序列长 度和氨基酸组成上的高度保守有关系。而基于Wg 基因部分序列构建的NJ 树、MP 树、 I 摘 要 ML 树以及贝叶斯树都能够得到较为一致的系统发育关系：外群大型溞Daphnia magna 最先从树的根部分出，整个昆虫纲聚为一支；在昆虫纲内，石蛃目昆虫作为原始的类群 最早分出，有翅类群聚为一支；在有翅类群中，直翅目昆虫聚为一支，形成一个单系群， 直翅目中分为2 个分支，支持直翅目2 亚目的分类系统。 关键词 直翅目 高级阶元 系统发育 Ubx Wg II Abstract Abstract The order Orthoptera belongs to Neoptera, Pterygota, insecta, including the grasshopper, cricket, mole crickets, and so on, with more than 25,000 species known in the world and 2,360 species recorded in Chin