甘蔗宿根矮化病原菌Lxx18460基因的克隆和表达分析.pdfVIP

摘要 Kfactor, 本研究克隆了甘蔗宿根矮化病病原菌中推测为抗泸因子(anti．sigma RskA)的膜蛋白(membrane 基因可读框349．717序列的原核表达载体，让其在大肠杆菌中表达，纯化并鉴定 提供理论基础和技术支持。主要结果如下： (NC Lxxl 8460基因全长(720 8460基因 bp)、含酶切位点但不含终止密码子的Lxxl (736 bp)。序列 分析表明：扩增到的Lxxl8460基因全长与NC006087的核苷酸序列同源性 100％，含酶切位点但不含终止密码子的两个目的DNA序列正确。生物信息学分 析得知，Lxxl8460蛋白相对分子量约为24．8 kDa，理论等电点pI为5．Ol，为可 溶性稳定蛋白；有一个跨膜区域，具体位于92．114位之间；含有一个典型的保 守结构，位于第43．238位之间，为蛋白质家族RskA；氨基酸同源性分析表明， Lxxl8460蛋白与其它菌种的RskA基因同源性低。 2．从感染RSD的甘蔗品种GTl 首尾设计引物，PCR扩增到为一条720 006087) 在感染RSD甘蔗品种GTl1成熟期茎和叶中的表达研究表明：茎、叶中均有 Lxxl8460基因的表达，在茎的基部第一节中其相对表达量最高，之后往尾梢方 向相对表达量逐渐减少，叶中相对表达量明显比茎低，茎尖和+1叶中相对表达 量最少。 0C条件下，在3个不同 浓度也不能诱导pET30a．MPD融合蛋白的表达；而在28 mmol／L 浓度和不同时间的IPTG诱导下，pET30a．MPD融合蛋白均表达，在1．0 IPTG诱导6 kDa。 h时其蛋白表达量最大，该重组融合蛋白分子量约27 析鉴定是Lxx的推测膜蛋白Lxxl8460。 关键词：甘蔗宿根矮化病Lxxl8460基因克隆表达分析原核表 达重组蛋白 II Themolecularof cloningLeifsoniaxyli … ■ l■ andits expresslonanalySIS ZhouDan (CollegeofAgriculture，GuangxiUniversity,Nanning Abstract The clonedthe membrane 8460 presentstudy hypothesized K and itsstructureand in analyzed expression (anti—sigmafactor，RskA)gene， infectedratoon bothofthefull