水稻NAC转录子家族NAP基因的克隆及其功能研究.pdfVIP

摘要 摘 要 水稻是我国目前种植面积最广的农作物之一，而叶片又是水稻最重要的营养器官，水稻 籽粒中有2／3以上的干物质是开花后通过光合作用获得的，因此叶片的功能及衰老对水稻产 量有重要影响。 近年来转录因子已被研究证明在植物分子育种中具有巨大的潜在价值和广阔的应用前 景。NAC转录因子是近十几年来已被证明在植物生长发育过程如胚发育、侧根形成、花发育 等，植物信号转导如生长素信号通路等，植物抵御生物胁追以及非生物胁迫中都有着重要的 作用。NAC转录因子家族基因AtNAP已经被证明在拟南芥中可以延缓叶片衰老，但该基因在 水稻中还未见其与作物生物量相关的报道。通过转基因技术和遗传分析手段的有力结合，将 会分离鉴定出更多的对植物改良有重大意义的转录因子，为进一步选育和改良植物的新品种 奠定了坚实的工作基础。 sativa 本研究通过生物信息学分析从水稻日本晴(OryzaL．)的基因组中克隆到一个与拟 OsNAP的功能，运用嵌合式显性抑制技术，抑制下游靶基因的表达。使用显性抑制元件SRDX 1品种。通过潮霉素、 pCAMBIAl304．35S：OsNAP．SRDX表达载体转化至水稻中花1 系的农艺性状进行了统计分析。 取得的主要研究结果如下： 1．NAC转录因子OsNAP的克隆 根据软件获得的序列设计两对特异引物，从水稻日本晴的基因组DNA克隆了OsNAP基因。 测序结果表明OsNAP的ORF为1 179bp，推测其编码蛋白含有392个氨基酸，等电点为8．55， 分子量为42．195KDa。 2．植物表达载体的构建 验证结果正确，可用于后续的水稻遗传转化。 3．水稻的遗传转化 以水稻中花ll品种为受体材料，通过农杆菌浸染方法将含有 l品种，目前已经获得有表 pCAMBIAl304·35S：OsNAP-SRDX植物表达载体转基因水稻中花1 型的转基因植株。 4．转基因株系的评价 通过转基因过程获得的TO代转基因株系，经过潮霉素鉴定选择阳性植株种入大田进行培 养。待T0代成熟后，对其种子发苗通过RealtimePCR和Western blot鉴定，筛选出4个OsNAP 高表达的阳性株系。将4株T1代转基因株系进行大田培养至种子成熟期，观察到Tl代转基 因株系较野生型相比有明显的延缓衰老的表型，单株分蘖数、单株总粒数、单穗饱和穗粒数、 千粒重、结实率等农艺性状都优于野生型。实验证明抑制NAP基因下游基因的表达能够延缓 水稻叶片衰老并可以提高产量，具有潜在的育种价值。 关键词：NAC转录因子；SRDX技术；水稻中花11；产量 from ofOs人彳P Characterization and Cloning inMolecular its Breeding L．andApplication Oryzasativa Abstract of blade1sone our