白芷愈伤组织总豆素的提纯化及合成调控.pdfVIP

Classified Index: CODE: 10075 U.D.C.: NO: A Dissertation for the Degree of M. Science Extraction and purification of the total coumarin in medicinal plant A. dahurica callus and Regulation on synthesis Candidate: Liangyan Xianyu Supervisor: Prof. Yuling Liang Academic Degree Applied for: Master of Science Specialty: Plant Biology University: Hebei University Date of Oral Examination: June, 2014 摘 要 摘 要 伞形科白芷（Angelica dahurica ）的干燥根是我国重要的中药材之一，野生白芷主 要分布在我国的东北及华北地区，含有挥发油、香豆素类及多糖类等天然产物。白芷总 香豆素是白芷的有效成分之一，具有多种药理作用。本研究以白芷愈伤组织为研究对象， 测定了白芷愈伤组织中总糖、总酸和总酚的含量，对白芷愈伤组织中总香豆素类化合物 的提取工艺及纯化条件进行了考察，研究了培养基成分及植物激素对愈伤组织中总香豆 素合成的调控作用。本研究为利用白芷培养细胞生产有效药物成分及次生代谢产物相关 研究奠定了基础。主要研究结果如下： 1、测定了白芷愈伤组织中总酸度、总酚和总糖的含量，分别为 1.261%、0.334%和 0.662% 。这些成分含量并不高，约为 2.257% ，可以选择合适的提取分离方法除去这部 分杂质，为总香豆素的分离纯化奠定基础。 2 、采用单因素试验和正交试验优化了白芷愈伤组织中总香豆素的超声提取工艺，确定 最佳提取条件为：料液比 1:15、乙醇浓度 60%、pH 9 、超声温度 70℃、超声时间 30min 。 欧前胡素在 3.0-30.0 ug/ml 范围内与吸光度呈良好的线性关系（r=0.9999 ）；平均加样回 收率为 98.03%，RSD=2.4% （n=10 ）。 3、选择对总香豆素纯化效果较佳的D101 大孔吸附树脂，采用单因素试验和正交试验 法优化其分离纯化工艺为：吸附流速 0.5mL/min，洗脱剂甲醇浓度 95% ，洗脱剂体积 9BV，洗脱流 0.5mL/min，总香豆素得率平均为 67.44% 。 4 、探讨了不同基本培养基、碳源和植物生长调节剂对白芷愈伤组织生长和总香豆素类 化合物积累的影响。结果表明,有利于白芷愈伤组织生长的最佳培养基为 B5+KT3.0mg/L+NAA0.2mg/L+30g/L 葡萄糖。有利于白芷愈伤组织中总香豆素积累的最 佳培养基为 B5+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+30g/L 蔗糖。 本文建立了白芷愈伤组织中总香豆素的含量的测定方法-紫外分光光度法，得到了 白芷愈伤组织中总香豆素超声提取以及大孔树脂纯化分离的相关参数，并探讨了影响白 芷愈伤组织中总香豆素含量变化的培养基，为细胞培养生产白芷香豆素及其合成代谢途 径研究建立了研究基础。 关键词 白芷愈伤组织 化学成分 总香豆素 提取纯化 合成调控 I