矮化大豆GmEPA41基因的克隆及功能分析.pdfVIP

摘要 曼曼曼量舅曼曼詈曼曼璺曼量蔓詈皇暑笪曼曼曼皇曼笪曼量曼舅笪舅曼曼葛曼曼璺曼曼曼舅量曼皇曼曼曼舅笪曼皇曼曼曼寞曼曼曼皇詈曼舅曼舅 摘 要 大豆是世界五大作物之一，：是非常重要的植物蛋白质和食用油资源，也是重要的优质工 业原料，大豆的综合利用和开发受到了世界各国重视。然而，近年来我国大豆生产却增长缓 慢，已经不能满足国内大豆需求。为解决这一矛盾，必须提高大豆产量、优化大豆种植，而 矮化大豆的研究有利于优势：赶豆的种植、提高大豆的产量，满足中国大豆日益增长的需求量。 的研究有利于我们在分子水平上研究大豆表型的成因，为大豆的分子育种奠定基础。 本文克隆了矮化大豆的膨胀素GmEXPA41基因的全长序列，对其进行信息学分析，最后 其进行发酵培养，为后期矮化大豆膨胀素的分离纯化、结构解析和功能验证奠定了基础。 具体研究结果如下： 1．通过序列比对设计了矮化大豆膨胀素基因的保守区引物，利用PCR技术克隆得到了 mRNA的全长序列。 和828bp的基因，最后将三段基因进行拼接获得了矮化大豆Gm删4J 基酸。与正常大豆氨基酸序列的同源性为96．47％。进行二级结构预测和比较，结果发现矮化 大豆的膨胀素蛋白比正常大豆的膨胀素蛋白多了一个0螺旋。通过计算机同源模型获得了矮 化大豆以及正常大豆膨胀素蛋白的三维结构，发现矮化大豆的膨胀素蛋白比正常大豆的膨胀 素蛋白的B折叠要略少一些。另外，以正常大豆expansin蛋白为受体进行了分子对接模拟， 找到与正常大豆的膨胀素蛋白结合较好的10个化合物，并模拟了它们的结合方式，初步研究 了一些化合物与膨胀素蛋白的相互作用。 3．构建了大肠杆菌重组菌[pET32a．expansinBL21(DE3)]，并且得到了高效表达菌株2号。 4．利用高效表达2号菌株为出发菌株，进行试管和三角瓶培养，然后以10％的接种量转 续培养4h后，离心收集菌体，最终发酵得到菌体湿重94．669。 关键词矮化大豆；膨胀素；基因克隆；原核表达；结构预测 Dwarf of and．Functional Cloning Analysis r411 Ljene S ct Ext Gmex naebyoExpansmSentimexpa4eG Abstract not a kindof world’Sfifth veryimportantvegetable isthe largestcrop．It’Sonly Soybean raw an ofindustrial andedibleoil also quality Drotein resource，butimportant the recent and are alloverworld．However,in