石蒜生物碱分析法的建立及其生物合成的研究.pdfVIP

摘要 本试验主要研究了石蒜鲜样提取生物碱的方法，优化了薄层色谱分离石蒜生物 碱的条件，‘利用薄层色谱分离制备石蒜生物碱单品，初步优化了柱层析分离生物碱 的条件，建立了高效液相色谱法分析石蒜生物碱的方法，测定了不同月份石蒜鳞茎 和叶中生物碱的含量以及各部位中生物碱的含量，试验还研究了石蒜芽诱导的体 系，分析了芽生长过程中的生物碱的变化以及加兰他敏和酪胺对其生物碱合成的影 响，初步探讨了石蒜生物碱的生物合成途径。获得以下试验结果： 1．鲜样提取石蒜生物碱。试验确定了石蒜鲜样生物碱较好的提取条件为浸提液为 90％乙醇、微波功率320W处理60+60 S、浸取时间为1h。此法不仅省时，而且能节省 材料，适宜于处理少量、珍贵的材料。 2．石蒜生物碱的薄层色谱分析方法。试验结果表明单向薄层色谱中展开剂三氯 甲烷：甲醇：氨水为9：1：O．1时的分离效果最好；双向薄层色谱中以乙酸乙酯： 甲醇：氨水=9：1：O．1为第一向，以三氯甲烷：甲醇：氨水=9：1：O．1为第二向， 分离效果比单向薄层色谱更好。利用双向TLC法制备了15种生物碱单品，并且生 物碱的纯度较高。此法操作较简单，对石蒜生物碱的分析有较大价值。 3．石蒜生物碱的柱层析分离。本试验研究了生物碱的硅胶柱层析初步分离纯化， cm 结果表明柱床体积80 酸乙酯：甲醇：氨水=9：1：O．05是柱层析分离石蒜生物碱的最佳条件，生物碱分离 效果较好，适宜于大量生物碱的初步分离和纯化。 4．高效液相色谱法(HPLC)分析石蒜生物碱，结果表明在ZOI强AX ODS．C18 度洗脱方式，流速1 法可以同时分析十几种生物碱，且准确率较高，为石蒜生物碱的研究提供精确的分析 手段。 5．试验确定了鳞茎和叶不同月份的生物碱含量差异很大，加兰他敏、力可拉敏 和石蒜碱的含量变化趋势一致。不同部位中生物碱差异也较大，生物碱含量最高的 为叶，其余依次为鳞茎、根、花和花葶，为合理利用石蒜资源提供了试验依据。 3．O 6．组织培养诱导石蒜芽的试验表明芽诱导最佳培养基是MS+6．BA mg·L’1 +NAA0．2 3 mg·L～，小鳞茎生根最佳培养基是MS+NAAmg·L～，“十”字法和“米”字 法切割鳞茎对芽诱导的影响差异不明显。 7．石蒜芽诱导生长过程中生物碱的变化以及添加物对芽合成生物碱的影响。结 果表明芽在培养过程中芽和小鳞茎的生物碱含量均先增加后减少，小鳞茎中的生物 碱和芽中相比含量和种类都要多。小鳞茎和芽与野外鳞茎和叶相比，含有特有的生 物碱。培养基添加酪胺或加兰他敏时，酪胺对生物碱的合成有促进作用，加兰他敏 对石蒜生物碱的合成有抑制作用，推测石蒜生物碱有相同的中间前体。 关键词：石蒜，生物碱，高效液相色谱，芽诱导，生物合成 Abstract 111this extraCtion aIticle，t11e址aloidsconditions of印cD，-西阳讹勉舶Shs锄ples waS condidonsofalI曲oids studied；the waS separationoptimizedbythill．1ayer cl印ma：tograpllic(TLC)；三．阳历口砌alkaloids、Vereconditionsof pr印aredbyTLC；me alkaloids w