石斑鱼虹彩病毒SGIV)ORF112编码类胶原结构蛋白的分子特征.pdfVIP

石斑鱼虹彩病毒(SGIV)ORFll2编码 类胶原结构蛋白的分子特征 专业：生物化学与分子生物学 硕士生：叶李莉 指导教师：秦启伟教授 摘 要 新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singaporegrouperiridovims，SGIV)是从新加坡养殖 石斑鱼中分离的强致病性病原，它可导致石斑鱼高达90％以上的死亡率，给石斑 鱼的养殖造成巨大的经济损失。因此研究该病毒功能基因在病毒组装，复制和侵 染中的作用，可以为了解病毒特性，确定疫苗候选基因提供实验依据。 经过人类多年来对病毒结构和病毒致病机理的深入研究发现，囊膜蛋白和带 有修饰基团的蛋白，如糖基化和磷酸化的蛋白，一般来说对病毒的生存起到关键 性的作用。类胶原结构蛋i刍(collagen．1ikeprotein，CLP)是一类含有胶原重复结构 WSSV的类胶原结构蛋白已经通过实验证实为具有糖基化修饰的病毒囊膜蛋白。 新加坡石斑鱼虹彩病毒(SGIV)是大分子DNA病毒，为双链环状DNA，其基 readingframe，ORE)。通过基因 因组全长140，13lbp，共有162个开放阅读框(Open 组学和蛋白质组学的研究，我们在SGIV中也发现了两个编码类胶原结构蛋白的 基因：ORF055和ORFll2。本论文选择SGIVORFll2编码的类胶原结构蛋白 CLPll2为研究对象。首先，我们对OREll2编码的类胶原结构蛋白进行生物信 息学分析，·结果显示该蛋白有多个预测的糖基化和磷酸化的位点，以及C端一个 由20个氨基酸组成的信号肽。其次，我们研究了CLPl12的分子特征：RNA转录 时序和蛋白质表达时序实验表明该基因编码的是一个病毒的晚期蛋白；在全病毒 蛋白和病毒囊膜蛋白的质谱鉴定的基础上，我们又利用免疫胶体金标记技术和 该蛋白在病毒复制过程中大量表达，其分子量位置也远高于通过蛋白质序列本身 算得的分子量，说明天然的CLPll2携带有蛋白的修饰基团。紧接着，我们检测 了CLPll2的亚细胞定位和在病毒复制中的作用。GFP融合蛋白转染和免疫荧光实 验的结果一致表明CLPll2在宿主细胞中呈胞质分布，且在病毒感染后围绕细胞 核和病毒包涵体呈现不均匀的点块状分布；进一步的MorpholinoOligo干扰实验 结果揭示ORFll2基因的沉默表达可以延迟病毒的复制进度。最后的SGIV感染GS 的超薄切片结果也显示出经过Morpholinooligos干扰的GS细胞中，病毒的组装 相对正常细胞感染的病毒颗粒来说，结构不完整。说明，CLPl12在病毒的组装 复制中起到帮助的作用。 根据以上这些结果，我们推测ORFll2编码的蛋白质CLPl12在SGIV侵染宿主 细胞之后的复制组装过程中起到一定的帮助作用，其功能值得进一步深入研究。 关键词： SGIV 类胶原结构蛋白(CLP)分子特征病毒复制RNA干扰 II Molecularcharacterizationof collagen—likeprotein SGIVORFll2 encoded by andMolecular Biology Major：Biochemistry Lili Name：Ye Qiwei Supervisor：Pr．Qin