天然小分子及其N-糖基化对OATP2B1介导的摄取转运的影响.pdfVIP

天然小分子及N-糖基化对 OATP2B1 介导的摄取转运的影响 中文摘要 中文摘要 有机阴离子转运多肽 （Orgainic antion transporting polypeptides ，OATPs ）是广 泛表达于人体组织器官细胞膜上的一类摄取转运蛋白，能够特异的转运多种两亲 性有机阴离子化合物、中性化合物甚至某些阳离子化合物进入细胞，被普遍认为 是决定各种药物、外源性化合物及毒素等吸收、分布、代谢及排泄的关键因素。 OATP2B1 是有机阴离子转运多肽家族中的主要成员之一，表达于人体肝脏、小肠、 脑、心、肾、胎盘及血小板等部位并能特异性的转运某些化合物包括内源性化合 物，如磺溴酞钠、3-硫酸雌酮、硫酸脱氢表雄酮、牛磺胆酸盐以及外源性药物如非 索非那定、格列本脲、他汀类药物等。由于 OATP2B1 在人体的广泛表达并能介导 多种药物转运入细胞，因此具有非常重要的作用。 天然植物在临床、饮食、养生等领域的使用与日俱增，加上天然植物的种类 及其化学成分复杂，使得日常生活中 OATPs 底物药与天然植物化学成分合用的情 况成为可能。若某些天然植物成分对 OATPs 产生影响，可能会引发 OATPs 介导的 药物-药物相互作用。为了避免不良药物相互作用的发生，同时保证药物疗效及用 药安全性，指导临床合理用药，本文就多种天然小分子对 OATP2B1 功能的影响展 开了研究。通过 LC-MS/MS 检测转运进细胞内 3-硫酸雌酮（E3S ）的量，我们对 不同植物来源的多种天然小分子对OATP2B1 介导的E3S 转运的影响进行了细胞水 平上的研究。结果显示，灯盏乙素 （S-7-G ）、桑皮黄素、甘草次酸及菊花梗叶黄 酮提取物对 OATP2B1 功能有明显的抑制作用，其 IC50 分别为 2.0µM、1.6µM、 13.3µM、2.25µg/mL，是本论文发现的 OATP2B1 抑制剂。同时，我们对槲皮素、 甘草次酸及其糖苷化合物也进行了浓度依赖的抑制研究。结果表明，槲皮素及甘 草次酸的糖苷化产物对 OATP2B1 的抑制作用与其苷元相比均减弱，IC50 是苷元的 5 倍以上。 N-糖基化作为一种常见且多样化的蛋白翻译后调控方式，对蛋白质在组织和 细胞中的定位、功能、活性、寿命和多样性起着非常重要的作用。然而，N-糖基 化如何对 OATP2B1 功能及表达产生影响以及 OATP2B1 有哪些可能的糖基化位点 I 中文摘要 天然小分子化合物及 N-糖基化对 OATP2B1 功能的影响 并未见报道。本文第二部分探究了 N-糖基化对 OATP2B1 功能及表达的影响。通 过生物信息学方法预测到了四个可能的 OATP2B1 N-糖基化位点，并将糖基化位点 的天冬酰胺残基突变成谷氨酰胺残基构建去糖基化突变的OATP2B1，分别为 N146Q 、N176Q 、N350Q 、N538Q ，进而在细胞水平对突变型和野生型 OATP2B1 进行了 E3S 转运功能及表达的比较和分析。实验结果显示，突变体N146Q 和N350Q 对 E3S 的摄取大大增加，而蛋白表达量并未增加；N176Q 突变体 E3S 摄取活性和 蛋白表达变化均不大；突变体N538Q E3S 摄取量减少了 44% ，蛋白表达量也明显 降低。 本课题的两部分研究使我们对 OATP2B1 转运功能有了进一步的了解。天然小 分子中 OATP2B1 新的抑制剂的发现提示我们，当服用 OATP2B1 底物药时，应注 意避免与前述这些抑制剂同时服用，以避免不良药物相互作用的发生。而 N-糖基 化对 OATP2B1 功能及表达影响的研究使我们对 OATP2B1 结构-功能关系有了更进 一步的了解，也为进一步的 OATP2B1 结构及功能相互关系的研究奠定基础。 关键词：有机阴离子转运多肽，OATP2B1，天然小分子，N-糖基化，药物-药 物相互作用 作 者：温凤娇 指导老师：贵春山