薏苡近缘种的分子细胞遗传学与研究.pdf

薏苡及其近缘种的分子细胞遗传学研究 年级：2005 级 研究生：曾艳华 导师：韩永华 副教授 专业：生物化学与分子生物学 研究方向：植物分子系统学 摘 要 本研究对8 份薏苡(Coix Lacryma-jobi L.)不同类型种质进行了同工酶分析，从分子水 平比较它们的亲缘关系。利用基因组原位杂交技术探讨了栽培薏苡，野生薏苡及水生薏苡 基因组间重复DNA 序列的同源程度和在染色体上的分布特征。利用荧光原位杂交技术对 薏苡近缘种玉米和类玉米及其杂交后代的异染色质纽重复序列进行了遗传稳定性研究。对 类玉米杂交后代“8493”的花粉母细胞减数分裂行为进行了观察，并对其亲本的亲缘关系 进行了探讨。主要结果如下： 1 同工酶分析采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE ）结合同工酶染色，比较分析了栽培薏 苡，野生薏苡和水生薏苡几个不同种质过氧化物酶（POD ）和多酚氧化酶（PPO ）同工酶 的分布和活性度。结果表明，过氧化物酶（POD ）和多酚氧化酶（PPO ）同工酶含量丰富， 活性强，酶谱复杂，酶带清晰，稳定，种间差异明显；过氧化物酶同工酶酶谱聚类分析表 明，供试的8 份种质薏苡大致可以聚为四类：1 和3 归为一类；4 、5、6 归为一类；7 和8 归为一类；2 号种质单独成一类。结果可以作为研究薏苡种内分类及种质亲缘关系的基础 依据。 2 用四倍体栽培薏苡（Coix lacryma-jobi,2n=20，）总基因组DNA 为探针，对栽培薏苡自 身，野生薏苡和水生薏苡的有丝分裂中期染色体进行基因组荧光原位杂交，杂交结果显示 栽培薏苡和野生薏苡染色体都被强烈而密集的杂交信号所标记，说明野生薏苡与栽培薏苡 在基因组染色体水平上的同源程度很高，保守重复序列占很大比重；水生薏苡的基因组中 有二十条染色体被强烈标记，有十条染色体杂交信号很弱，说明其基因组中有二十条染色 体DNA 成分与栽培薏苡的基因组DNA 高度同源，推断供试的水生薏苡种属广西六倍体 水生薏苡居群。 3 利用组成玉米异染色质纽的 180-bp 重复序列和TR-1 元件对二倍体多年生类玉米(Zea diploperennis,DP) 、玉米自交系330 及其远缘杂交后代异源种质纯系540 的有丝分裂中期 染色体进行了荧光原位杂交，结果证实了玉米自交系330 异染色质纽位于染色体近末端， DP 异染色质纽位于末端，杂交后代540 的纽全部位于近末端，而且数目比亲本要少。所 有的随体都含有纽的成分。 - I - 4 利用改良的苯酚品红压片技术对二倍体多年生类玉米与墨西哥类玉米的杂交种“8493” 花粉母细胞减数分裂行为进行了观察，结果表明，减数分裂过程基本正常，花粉母细胞减 数分裂中期I 和中期II 少数细胞可见赤道板外染色体，后期I 和后期II 部分细胞出现染 色体桥及落后染色体，减数分裂过程中染色体行为异常的花粉母细胞约占11.1%，但由于 发生频率较低，对整个减数分裂过程影响不大，不影响杂种花粉的育性；利用FISH 技术 对减数分裂粗线期和终变期染色体进行了45S rDNA 的定位，结果显示：45S rDNA 定位 在一个二价体上。研究结果从细胞和分子水平上证明了两亲本含有相似的染色体组，亲缘 关系很近。 关键词：薏苡；亲缘关系；类玉米；同工酶；荧光原位杂交 - II - Molecular Cytogenetics Study for Coix L. and Its Closest Relatives Grade: 2005 Master Candidate: Zeng yanhua Supervior: Han yonghua Speciality: Biochemistry and Molecular Biology Subject: Plant Molecular Systematics Abstrac