新型酿酒酵母整合载体构建及构建方法及研究.pdf

中文摘要 本研究主要探讨一种酵母菌染色体定点整合载体的构建方法及其实现染色 体定点整合的可行性。参照SGD数据库提供的酵母菌全基因组序列信息，选取 4号染色体上基因HEMl3上游…750 2150bp处无基因活性的DNA序列作为基 因定点整合的靶位点。在这1400bp的DNA序列中选取毫不重合的两部分，大 小分别为744bp和602bp，作为整合载体的两个同源臂homl和hom2。 8-INT4是本研究需要构建的目的载体，它的构建基础是本实验室 载体pUCl 和hom2按照其在染色体上的位置和方向分别取代pUCI8-RYUR上的两段repeat 序列。由此，构建成了pUCl8．INT4载体。 实现基因定点整合的验证基因。用PCR方法扩增得到ADHl基因序列，利用限 制性内切酶位点，使其连接在pUCl8．烈T4载体上，取代URA3序列，构建成 8-INT4-A载体。 pUCl 8-INT4 pUCl8．INT4载体实现基因定点整合需要两个步骤，第一步：将pUC