应用小鼠胚胎干胞(escs)裂解液逆转化胎儿成纤维细胞(mefs)为诱导性多能干细胞(ipscs)的研究.pdf

曼曼曼曼曼量舅鼍皇曼曼鼍寡曼曼曼曼曼曼曼曼皇寡曼曼曼曼曼量皇曼曼曼曼皇鲁曼曼曼曼皇曼曼曼i㈦公：=。掣”=…l二I‘罂1 目 录 摘 要…………………………………………………………………………………………………………………………………I Abstract…………．．…………………………．．………………．．．．．．．．．……………．……………………………………．………VII 第一部分文献综述…………………………………………………………………………………1 哺乳动物体细胞重编程的研究进展…………………………………………………………．．1 1．体细胞重编程的方法……………………………………………………………．1 1．1体细胞核移植(SQ盯)方法……………………………………………．1 1．2细胞融合……………………………………………………………………3 1．3限定性转录因子介导的iPSCs技术………………………………………6 1．4细胞提取物介导的体细胞重编程…………………………………………7 2．体细胞重编程的机制……………………………………………………………．9 2．1基因表达的表观影响………………………………………………………9 2．2去分化和转分化的表观控制……………………………………………．13 3．增强重编程效率的化学物质……………………………………………………17 3．1表观遗传途径……………………………………………………………．17 3．2信号通路途径……………………………………………………………．21 第二部分实验部分………………………………………………………………………………．．23 第一章用于分离小鼠ESCs的三种囊胚有效生成途径研究………………………………23 第一节小鼠体内受精囊胚内细胞团(ICM)集落获取的条件优化…………………23 1材料…………………………………………………………………………………………………………23 1．1实验动物…………………………………………………………………．23 l。2仪器与设备………………………………………………………………。23 1．3药品与试剂………………………………………………………………．24 1．4主要溶液配制……………………………………………………………．25 2方法…………………………………………………………………………………………………………26 2．1小鼠的超数排卵…………………………………………………………．．26 2．2MEFs的原代培养…………………………………………………………26 2．3MEFs的传代培养和纯化…………………………………………………26 2．4MEFs的冻存与复苏………………………………………………………26 2．5MEFs饲养层的制备………………………………………………………27 2．6体内受精囊胚的采集与培养……………………………………………．27 2．7数据统计分析……………………………………………………………．27 3结果与分析………………………………………………………………………27 3．1小鼠胎龄对原代MEFs分离效果的影响………………………………．27 3．2不同传代次数MEFs的培养特征………………………………………．28 3．3不同胚龄小鼠的胚胎类型及其分布情况………………………………．28 3。4小鼠胚胎采集时间对ICM集落获取效率的影响………………………29 3．5不同囊胚培养体系对ICM集落分离培养效率的影响…………………29