鳙鱼性别特异片的筛选和克隆.pdfVIP

摘要 关于动物性别的研究一直深受人们的关注，以哺乳动物为代表已取得了许多可喜的 成果。鱼类在脊椎动物进化系统中处于处于承自蛸后的地位， 具有很丰富的生物学特 征以及重大的经济价值，是在脊椎动物中种类最多，分布又最广的类群，因此，对鱼类 性别决定机制的研究具有重要的意义。目前已经发现的鱼类的性染色体类型只占很小的 比例，其性染色体和常染色体很难进行区分在外形上，是因为鱼类的性染色体处于动物 染色体进化的原始状态。利用传统的细胞遗传学技术很难检测到在鱼类中雌雄个体基因 组水平上的差异，但是随着生物分子学技术的快速发展，把分子标记技术应用于寻找鱼 一· 类性别特异片段的成功事例不断出现，为鉴定鱼类的遗传性别奠定了基础。 对其开展了一系列分子细胞遗传学研究鳙鱼[Aristichthys 目，鲤科，鲢亚科，鳙属。我国各大水系均有此鱼，分布于亚洲东部，以长江流域中、 下游地区为主要产地。我国淡水养殖业中的“四大家鱼”之一，是我国重要经济鱼类， 在我国鲤科鱼类中具有很重要的经济价值。本研究是首次利用分子标记寻找鳙鱼的性别 特异片段。 ～ 本研究利用采自河南省水产研究院詹店养殖基地的鳙鱼为材料，选择420条长lObp ’ 个体都出现了一条特异片段，经克隆和碱基测序后，发现该片段长600bp和754bp。根据 该片段碱基序列分别设计一对特异引物，以雌雄个体基因组DNA为模板进行PCR扩增， l 引#勿ISSR-65在雌性个体中出现特异扩增产物。利用地高辛对该片段进行标记作为探针， 斑点杂交和Southern杂交显示，阳性信号出现于雌性个体中，而在雄性个体中没有发现 任何杂交信号。BLAST检索比对，结果没有发现任何与其同源的序列。 以上结果表明，我们成功的分离到了鳙鱼的雌性特异片段，为探讨鱼类的性别决定 ’ 机制以及鱼类遗传性别的识别奠定了理论基础。 ’ 、 ／ 关键词： 鳙鱼，RAPD，ISSR，性别特异片段，性别 ABSTRACT been Scientistshave intrestedintheresearchofanimal achievementshavebeen sex．Manyheartening madeinmammals．Fishesan roleintheevolutionof arcalsothemost playimportant vertebrate．111ey in varied andmostvastindistribution rich characteristics species amongvertebrate，possessingbiological and economic isof to thesexdetermination significantvalue．Hence，it mechanism greatsignificancestudy offishes．Thesexchromosomeisinthe stateofevolutioninfish．sothatitishardto primitive