EP7.0与CP比较(肝素钠).docVIP

EP7与CP2010 检验项目及方法对比 2010年10月  目录 一、比旋度 3 二、鉴别 4 三、总氮量 5 四、酸碱度 7 五、溶液澄清度 9 六、溶液颜色 11 七、吸光度 17 八、有关物质 20 九、残留溶剂 24 十、干燥失重 27 十一、炽灼残渣 31 十二、钠含量 34 十三、重金属 35 十四、细菌内毒素 38 十五、效价 48 十六、微生物 50 一、比旋度 中国药典2010年版 欧洲药典EP7.0 ≥+50° 无 分析方法比对：CP比EP多比旋测定。 二、鉴别 中国药典2010年版 欧洲药典EP7 （1）有关物质项下记录图谱，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。有关物质的液相色谱：试验溶液的色谱主峰与保留时间相似并且与对照溶液的峰形相似。核磁共振光谱法：肝素钠大峰必须在2.04 ppm，3.27 ppm（双峰），4.34 ppm，5.22 ppm和5.42 ppm，所有的误差应在±0.03 ppm。 得到1H-NMR光谱做NMR鉴别的肝素钠的1H-NMR光谱这2个光谱有相似强度。硫酸皮肤素的甲基在2.08±0.03处有信号。在0.10-2.00 ppm2.10-3.10 ppm和5.70-8.00 ppm未被鉴别的信号。溶液或过程物质的信号也许会出现并且必须鉴别被接受。肝素钠光谱信号区域强度的变化或许会出现：区域强度变化在3.35 ppm-4.55 ppm之间，这个区域信号模式有但是强度不同。 补充：出现在2.10 ppm处的信号或许会被观察到并且将不会被硫酸皮肤素混淆。（2）钠盐鉴别反应钠盐反应。 三、总氮量 中国药典2010年版 欧洲药典EP7 1.5～2.5 1.5～2.5 试药与试液： 无水硫酸钠、浓硫酸、30%硫酸铜溶液、2%硼酸溶液、40%氢氧化钠、甲基红—溴甲酚绿 (取0.1%甲基红的乙醇溶液20ml，加0.2%溴甲酚绿的乙醇溶液30ml，摇匀，即得)、混合液0.05mol/L硫酸滴定液。 仪器与设备：半微量定氮仪、电炉、酸式滴定管、三角瓶。 操作规程（半微量法） 消化 ●取样供试品0.1g(约相当于含氮量1.0~2.0mg)，精密称定，无水硫酸钠0.3g放入干燥的25ml凯氏烧瓶中，滴加30%硫酸铜5滴，加浓硫酸2ml；同法操作不加样品为空白。 ● 在凯氏烧瓶中放一小漏斗，并使烧瓶成45℃斜置，用小火缓缓加热使溶液保持在沸点以下。 ● 待溶液由黑色变为澄明的棕黄色时，逐步加大火力。 ● 沸腾至溶液成澄明的绿色后，继续加热10min，放冷。 蒸馏 ●取2%硼酸溶液15ml置100ml锥形瓶中，加甲基红—溴甲酚绿混合指示液2滴。 ● 将冷凝管尖端插入锥形瓶中吸收液液面下。 ● 将消化好的供试品加入2ml纯化水，将凯氏烧瓶中的内容物转入定氮仪中，用少量水淋洗凯氏烧瓶数次。 ● 继续加入40%氢氧化钠溶液10ml，用少量水再洗定氮仪口部数次，加塞。 ● 向蒸馏瓶中加水适量及甲基红指示液两滴，并加稀硫酸使成酸性，开始加热进行蒸汽蒸馏，至硼酸液变为蓝绿色时起，继续蒸馏15min。 ● 将冷凝管尖端提出液面，使蒸气继续冲洗约1min，用水淋洗尖端后停止蒸馏。 滴定：用0.005mol/L的硫酸滴定液，滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色。并将滴定的结果用空白试验校正，每1ml的硫酸液(0.005mol/L)相当于0.1401mg的N。 含氮量%= 式中：T为滴定度(mg/ml)； VS与VO 分别为供试品与空白滴定时硫酸滴定液消耗的体积； F为滴定液的F值(为滴定液试剂浓度/理论浓度)； W为供试品的重量试药与试液： 仪器与设备：半微量定氮仪、电炉、酸式滴定管、三角瓶。操作小漏斗 m：样品的重量（mg） 分析对比结果：两种方法基本相同。EP方法的消化和CP基本一致，在碱性条件下将N转化为NH3蒸出用0.01M盐酸中和，多余的盐酸用氢氧化钠滴定，同时用葡萄糖验证消化是否完全，由于葡萄糖不含N，因此不消耗盐酸。而CP是在微酸性条件下，将硫酸铵蒸出直接滴定。EP方法在风险控制上优于CP 四、酸碱度 中国药典2010版 欧洲药典EP7 5.0~7.5 5.5~8.0 仪器：酸度计 试剂： 邻苯二甲酸氢钾缓冲液 (pH4.00) ：邻苯二甲酸氢钾缓冲剂一袋，按说明置于250ml容量瓶中加无二氧化碳水至刻度，摇匀即得。 混合磷酸盐缓冲液(pH6.86) ：混合磷酸盐缓冲剂一袋，按说明置于250ml容量瓶中加无二氧化碳水至刻度，摇匀即得。 硼砂缓冲液（pH9.18）：硼砂缓冲剂一袋，按说明置于250ml容量瓶中加无